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科研戰(zhàn)神來(lái)了新蟲(chóng) (小有名氣)
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建議收藏！各類組織取材注意事項(xiàng)全攻略
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在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中，組織取材是實(shí)驗(yàn)成功的關(guān)鍵第一步。不同組織的結(jié)構(gòu)和特性各異，取材操作稍有不慎就可能影響后續(xù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果。今天，我們就為大家詳細(xì)梳理腦、心臟、肝臟、脾臟、肺臟、腎臟、腸道、生殖器官、骨組織、皮膚、肌肉、脊髓等各類組織的取材注意事項(xiàng)，助力你的實(shí)驗(yàn)順利開(kāi)展！ 一、腦組織處死小鼠后需盡快打開(kāi)顱骨，操作時(shí)要小心，避免損傷腦組織。用小鑷子和剪刀輕輕分離腦組織與顱骨，分離腦干、左右大腦半球時(shí)，切勿過(guò)度牽拉或擠壓。 取材后立即放入預(yù)冷的固定液（如4%多聚甲醛）中，固定液用量為腦組織體積的10 - 20倍，以確保固定效果。 1、大腦：大鼠和小鼠整體取材，用紗布包裹固定；犬等較大動(dòng)物在兩大腦中央前后區(qū)、海馬及基底結(jié)等處各取1塊，大小為1.5cm×1.5cm×0.5cm。 2、小腦：經(jīng)大腦橫裂分離后取出，小動(dòng)物整體取材并用紗布包裹固定；大動(dòng)物取1塊1.5cm×1.5cm×0.5cm的組織，需包括小腦中間部。 二、心臟組織胸腔剖開(kāi)后直接切下心臟，操作時(shí)避免擠壓心肌，防止組織損傷。打開(kāi)胸腔時(shí)，注意保護(hù)心臟表面的血管和心包膜。 用鑷子輕輕夾住心尖完整取出心臟，若需單獨(dú)取材心房或心室，需準(zhǔn)確切割，避免破壞心肌結(jié)構(gòu)。 后續(xù)分析若為病理學(xué)檢查，可采用合適固定液固定；若為分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)（如RNA提�。�，則迅速放入RNA保存液或液氮中冷凍保存。 三、肝臟組織暴露肝臟時(shí)，不要撕裂肝葉間的連接組織，用剪刀沿肝葉邊緣準(zhǔn)確剪下肝組織塊，避免取到膽囊等周圍組織。 肝臟富含酶類，取材后應(yīng)盡快處理，固定液需及時(shí)滲透到組織內(nèi)部，防止自溶。 在最大的肝葉各取1塊包含包膜的組織，取材大�。盒�(dòng)物為1.0cm×1.0cm×0.5cm，大動(dòng)物3.0cm×2.0cm×0.5cm；肝臟取材厚度不應(yīng)超0.5cm，免疫組化用途取材為1.0cm×1.0cm×0.2cm。如有可視病灶，需包含病灶和臨近正常組織，可先切取大塊固定數(shù)小時(shí)至過(guò)夜，再修組織并換固定液繼續(xù)固定；有膽囊的動(dòng)物應(yīng)取膽囊壁組織。 四、脾臟組織找到脾臟后，輕輕提起，用剪刀剪斷周圍系膜組織，完整取出脾臟。由于脾臟質(zhì)地較脆，操作時(shí)要輕柔，避免擠壓造成內(nèi)部組織結(jié)構(gòu)破壞。取材后可根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求進(jìn)行固定或冷凍保存。 五、肺臟組織打開(kāi)胸腔后，小心分離肺臟與心臟、縱隔等周圍組織�？扇〕稣麄�(gè)肺臟，若只需部分肺葉，需準(zhǔn)確切割，保持肺組織完整性，避免肺泡破裂。 肺組織含大量氣體，放入固定液或保存液時(shí)，要確保其完全浸沒(méi)，以保證固定或保存效果。 取兩肺下葉和肺尖部組織各一塊（包括胸膜），大小為1.5cm×1.5cm×0.5cm；若有病變，可根據(jù)病變大小與多少加取組織塊。 六、腎臟組織打開(kāi)腹腔后，小心分離腎周脂肪和結(jié)締組織，避免損傷腎臟包膜。用鑷子輕輕提起腎臟，剪斷輸尿管等連接組織，完整取出腎臟。若需區(qū)分皮質(zhì)和髓質(zhì)取材，需準(zhǔn)確切割，取材后盡快處理。 左右腎臟各取1塊，組織需包括皮質(zhì)、髓質(zhì)、腎乳頭及被膜等各層結(jié)構(gòu)，大小為1.5cm×1.5cm×0.5cm；膀胱取1塊包含全層結(jié)構(gòu)的組織，大小為1.5cm×1.5cm；若有可視病變，加取病變及周圍組織。 七、腸道組織確定取材部位（如十二指腸、空腸、回腸或結(jié)腸）后，小心分離腸道與周圍腸系膜組織。切斷腸道時(shí)，切口要整齊，避免內(nèi)容物泄漏污染組織；若需分析腸道內(nèi)容物，要先收集內(nèi)容物再取材。 腸道組織較薄且易變形，取材后應(yīng)妥善固定或保存；研究腸道黏膜等特殊結(jié)構(gòu)時(shí)，取材要盡量保持黏膜完整性。 分別在十二指腸逆行部和反迥部各取1塊全層結(jié)構(gòu)組織；小腸分別在空腸及回腸末端各取1塊全層結(jié)構(gòu)組織；大腸分別在結(jié)腸和直腸各取1塊全層結(jié)構(gòu)組織；所取材料盡量保持肉眼標(biāo)本完整性，一般取長(zhǎng)度為1~2cm。 八、生殖器官（睪丸、卵巢、子宮等）1、睪丸：分離陰囊皮膚后小心取出，避免損傷被膜和曲細(xì)精管結(jié)構(gòu)。 2、卵巢：準(zhǔn)確找到位置，小心分離周圍脂肪和輸卵管組織，完整取出。 生殖器官體積較小，可整體取材固定后，再分別取睪丸、附睪、前列腺（大動(dòng)物）左外側(cè)緣及中間部各一塊。 3、子宮：子宮是中空臟器，宮頸易發(fā)病變，需取全層。子宮、宮頸（全層）及卵巢各取1塊組織，大小為1.5cm×1.5cm×0.2cm。 九、骨組織可從四肢或脊柱處獲取骨組織，使用專用鉗子和鋸進(jìn)行取材，操作時(shí)佩戴手套以防感染。取材后應(yīng)去除附著的肌肉和軟組織，可直接冷凍保存或固定在乙醇等固定液中以備后續(xù)實(shí)驗(yàn)。 十、皮膚和皮下組織小鼠背部皮膚可作為取材區(qū)域，用剪刀或手術(shù)刀切下特定面積的皮膚。操作時(shí)保證器械無(wú)菌，避免皮膚外部微生物污染，皮下組織盡量與皮膚分開(kāi)保存。 皮膚組織用于組織學(xué)觀察和免疫組化時(shí)，建議立即放入固定液；若需RNA提取，直接冷凍保存。 十一、肌肉組織一般取四肢肌肉、腹部肌肉等，取材前用生理鹽水沖洗表面，減少血液殘留。操作時(shí)注意無(wú)菌，避免牽拉和擠壓，確保組織完整�？筛鶕�(jù)需要選擇立即冷凍保存或放入適當(dāng)?shù)墓潭ㄒ褐小?#160;十二、脊髓自顱底至底椎沿背部中線切開(kāi)皮膚，剝離棘突與椎板上的骨膜、軟組織等，在靠近棘突兩旁向下用鋸垂直鋸開(kāi)，動(dòng)作小心，勿損傷脊髓；下端在薦椎和尾椎交界處橫行鋸開(kāi)，用鉗從上向下掀起已分離的棘突和椎板，暴露出硬脊膜，沿硬脊膜外切斷各神經(jīng)根，用鑷子夾住硬脊膜向外輕拉，將硬脊膜和脊髓一起取出，然后沿脊髓前后正中線剪開(kāi)硬脊膜，注入固定液。分別于頸、胸、腰髓階段各取一段長(zhǎng)0.5cm的組織。 以上就是各類組織取材的關(guān)鍵注意事項(xiàng)啦！實(shí)驗(yàn)操作中，大家務(wù)必根據(jù)組織特性和實(shí)驗(yàn)?zāi)康�，�?yán)格遵循這些細(xì)節(jié)，才能為后續(xù)實(shí)驗(yàn)打下堅(jiān)實(shí)基礎(chǔ)。 |
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