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小木蟲論壇-學術科研互動平臺 » 化學化工區(qū) » 分析 » 化學分析 » 多肽和載體蛋白的偶聯(lián)
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多肽和載體蛋白的偶聯(lián) 已有1人參與
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肽-載體蛋白銜接多用于制備抗毒素類抗體，單獨的單個通常通常小小的不足以激起充分的免疫反應，而帶有很多抗原表位的載體蛋白有利于刺激輔助性T細胞，進一步誘導B細胞免疫反應。合生生物偶聯(lián)蛋白主要如下幾種： KLH（Keyhole Limpet Hemocyanin），即血藍蛋白，由于KLH比BSA有更高的免疫原性，因此是最常被替換的載體蛋白。 BSA（牛血清白蛋白），即牛血清白蛋白，屬于最穩(wěn)定的和可溶的白蛋白。BSA的不利之處在于在很多實驗中，它被當作封閉劑使用，如果多肽-BSA偶聯(lián)物的抗血清用于這樣的檢測分析中，通常會出現(xiàn)假陽性，因為這些血清含有抗BSA的抗體。 OVA（Ovalbumin），即雞卵白蛋白，它可作為第二載體蛋白去驗證抗體是否僅針對靶向而并非載體蛋白（如BSA）。對在動物體內產生免疫反應而言，大多數(shù)多肽的分子量都太小。將多肽與載體蛋白如KLH等偶聯(lián)之后，不僅能增加抗原的大小，也能增強免疫性。我們可以提供與KLH,BSA和OVA蛋白的偶聯(lián)。大多數(shù)客戶選擇與KLH交聯(lián)，因為KLH的免疫性更好，而且BSA在很多實驗中作為Blocking試劑，由于動物體內既會產生對多肽的抗體也會產生對載體蛋白的抗體，這樣會出現(xiàn)假陽性。 KLH，BSA,OVA是分子量十分巨大的蛋白，有幾百萬Da，所以在其分子表面有大量的活性基團，最常用于偶聯(lián)的是伯胺基團。小的多肽通常也帶有不同基團可以用于偶聯(lián)，常用的有伯胺基團，羧基和巰基。 多肽與KLH的偶聯(lián)就是利用這些基團，再通過交聯(lián)劑(crosslinker)，將多肽上的巰基/羧基/伯胺與KLH上的伯胺相連，從而形成共價偶聯(lián)，制備成完全抗原，用于免疫動物獲得抗體。所以偶聯(lián)的伯胺應該是來自于賴氨酸側鏈和N端，而偶聯(lián)的羧基則來自于天冬氨酸，谷氨酸和C端，巰基則來自于半胱氨酸。至于偶聯(lián)上去的數(shù)量，和加入的肽段，交聯(lián)劑，KLH的摩爾比例有關。通常一分子KLH上可能會偶聯(lián)上百個肽段。 |
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2樓2025-09-19 08:59:51
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