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Jiman_2025鐵蟲(chóng) (初入文壇)
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[交流]
細(xì)胞能被慢病毒感染，但熒光很弱是什么原因
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慢病毒感染細(xì)胞后，由于目的基因與熒光蛋白表達(dá)的方式不一樣，導(dǎo)致熒光表達(dá)有差異的情況也時(shí)有發(fā)生。細(xì)胞中熒光強(qiáng)度受病毒載體及細(xì)胞等因素影響。如出現(xiàn)熒光弱的情況，可以從以下5個(gè)方面排查： 1、融合熒光：目的基因與熒光蛋白融合表達(dá)，少數(shù)的目的基因?qū)θ诤系臒晒獾鞍椎臒晒庥杏绊憽？赡苁悄康幕虮磉_(dá)量低，導(dǎo)致融合蛋白的表達(dá)量也低，進(jìn)而熒光不亮；也可能是目的基因?qū)晒獾鞍椎慕Y(jié)構(gòu)和功能有影響，導(dǎo)致熒光不亮。 2、IRES連接：使用目的基因-IRES-熒光蛋白的結(jié)構(gòu)，由于IRES下游基因表達(dá)偏弱，容易導(dǎo)致熒光弱。 3、2A連接：使用目的基因-2A-熒光蛋白結(jié)構(gòu)，2A上游的目的基因和下游熒光蛋白在蛋白翻譯時(shí)斷開(kāi)，如果上游目的基因表達(dá)量低，也會(huì)導(dǎo)致下游熒光蛋白表達(dá)受影響，導(dǎo)致熒光弱，此外，2A元件連接斷開(kāi)不完全，可能存在融合表達(dá)同樣存在影響。 4、啟動(dòng)子影響：目的基因和熒光蛋白使用不同的啟動(dòng)子表達(dá)，熒光蛋白接在強(qiáng)啟動(dòng)子后面時(shí)熒光表達(dá)強(qiáng)，接在弱啟動(dòng)子后面時(shí)熒光表達(dá)較弱，同時(shí)，不同類型的啟動(dòng)子在不同細(xì)胞中啟動(dòng)效果也會(huì)有影響，某些細(xì)胞可能需要特殊的啟動(dòng)子啟動(dòng)熒光或者目的基因表達(dá)。 5、細(xì)胞增殖及觀察時(shí)間：通常目的細(xì)胞感染的慢病毒顆粒數(shù)越多，細(xì)胞本身增殖越快，熒光會(huì)越強(qiáng)；慢病毒在增殖較快的細(xì)胞中感染96~120h后，熒光蛋白表達(dá)才達(dá)到峰值；在增殖較慢的細(xì)胞中感染后，熒光蛋白表達(dá)達(dá)到峰值需要更長(zhǎng)的時(shí)間。 |
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