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畢合生物2024銅蟲 (小有名氣)
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[交流]
倒平板、劃平板、涂布，微生物實驗的三大絕招
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做微生物實驗，倒平板、劃平板、涂布這三大操作可是基礎(chǔ)中的基礎(chǔ)！這些操作的要點和技巧，讓你的實驗又快又好。 1️⃣ 倒平板：溫度與平衡的把控 倒平板可不是簡單的事兒，溫度和平衡得精準(zhǔn)控制。核心就是給微生物打造一個平整又適宜生長的“小窩”。滅菌后的瓊脂培養(yǎng)基冷卻到45-50℃，手感溫?zé)岬臅r候，就是倒平板的最佳時機(jī)啦。這時候，在火焰旁的無菌區(qū)，把培養(yǎng)基傾斜注入培養(yǎng)皿，動作要穩(wěn)準(zhǔn)。培養(yǎng)基的量很關(guān)鍵，過少平板易干裂，過多則影響后續(xù)劃線分離。倒入培養(yǎng)基后，迅速水平旋轉(zhuǎn)培養(yǎng)皿，讓培養(yǎng)基均勻鋪開。等它自然凝固后，倒置存放，防止冷凝水滴落，給微生物營造穩(wěn)定的生長環(huán)境。 2️⃣ 劃平板：微生物分離的關(guān)鍵步驟 劃平板的目的是把混合菌液里的微生物分離成獨立的單菌落。以四區(qū)劃線法為例，第一區(qū)密集劃線，讓菌液初步分布。劃完后，接種環(huán)在火焰上灼燒滅菌，從第一區(qū)末端取菌，在第二區(qū)劃線，線條間距稍寬，繼續(xù)稀釋菌體。每劃完一區(qū)，都得滅菌，避免交叉污染。劃平板時，接種環(huán)與平板表面的角度保持在30°左右，手腕發(fā)力要穩(wěn)，避免劃破瓊脂。每次灼燒后，接種環(huán)要充分冷卻，不然高溫會殺死菌體。 3️⃣ 涂布：菌液均勻分布的技巧 涂布是把定量菌液均勻分布到平板表面的操作，常用于活菌計數(shù)或制備均勻菌苔。取0.1mL稀釋后的菌液，滴在平板中央，用滅菌后的涂布棒快速旋轉(zhuǎn)涂布。涂布棒先蘸70%酒精灼燒滅菌，待酒精燃盡后冷卻幾秒再用。涂布時，手腕帶動平板勻速轉(zhuǎn)動，讓菌液均勻擴(kuò)散。涂布前，平板要提前倒置烘干，避免冷凝水導(dǎo)致菌液流動。稀釋度也很關(guān)鍵，菌液過濃菌落重疊，過稀則可能無菌落生長。通常涂布后平板菌落數(shù)在30-300個為宜。 4️⃣ 實驗小貼士 倒平板：溫度控制在45-50℃，操作在火焰旁進(jìn)行，避免雜菌污染。 劃平板：接種環(huán)與平板表面角度30°，手腕發(fā)力穩(wěn)，每次灼燒后冷卻。 涂布：平板提前烘干，涂布棒滅菌后冷卻，稀釋度適中。 畢合生物提供服務(wù)內(nèi)容：分子生物學(xué)、免疫, 重組蛋白及ELISA相關(guān)、活性小分子化合物、高端化學(xué)、材料化學(xué)、細(xì)胞資源庫與培養(yǎng)相關(guān)、生命科學(xué)、天然產(chǎn)物 |
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