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科研戰(zhàn)神來(lái)了新蟲(chóng) (小有名氣)
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質(zhì)粒，菌液，病毒的保存要點(diǎn)
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1質(zhì)粒與大腸桿菌菌液的保存 在基因工程領(lǐng)域，質(zhì)粒作為重要載體，可攜帶外源基因進(jìn)入宿主細(xì)胞，并實(shí)現(xiàn)該基因的復(fù)制與功能表達(dá)。其保存方式主要有以下兩種：1.直接保存法將質(zhì)粒溶解于 TE 緩沖液中或無(wú)菌水中即可完成保存。具體保存時(shí)長(zhǎng)因溫度而異：4℃條件下可實(shí)現(xiàn)短期保存；-20℃環(huán)境中保存期限約為半年；若置于 - 80℃，則能延長(zhǎng)保存時(shí)間。2.宿主保存法除直接保存質(zhì)粒外，還可通過(guò)將質(zhì)粒導(dǎo)入宿主菌（大腸桿菌為常用選擇）的方式進(jìn)行保存。大腸桿菌的長(zhǎng)期保存可采用多種方法，如液體石蠟法、硅膠保存法，或在菌液中添加甘油、二甲基亞砜（DMSO）等保護(hù)劑。甘油菌的保存性能較為優(yōu)異：-20℃條件下至少可保存一年；在 - 80℃或液氮環(huán)境中，保存期限可達(dá) 3-5 年，甘油菌的保存方法：由于甘油比較粘稠，所以我們可以將甘油與水1：1的混合，配成50%的甘油，并進(jìn)行滅菌操作，再進(jìn)行保菌處理的時(shí)候先在EP管中加入500μL的甘油，再加入500μL的菌液，充分混合，在EP管上標(biāo)記信息，置于- 80℃長(zhǎng)期保存，且復(fù)蘇后細(xì)菌仍能正常生長(zhǎng)，活力不受影響。建議保存時(shí)采取多管分裝的方式。2菌種的復(fù)蘇操作 復(fù)蘇菌種時(shí)，可用接種環(huán)或牙簽挑取少量?jī)鼋Y(jié)的菌種，接種至固體平板上，隨后在 37℃條件下培養(yǎng) 8-12 小時(shí)。 需要注意的是從冰箱取出甘油菌后需置于低溫環(huán)境或 0℃冰浴中，使用完畢后應(yīng)及時(shí)放回冰箱。接種時(shí)需挑取表面已融化的部分，避免整體融解 —— 反復(fù)凍融易導(dǎo)致細(xì)菌細(xì)胞壁破裂。若細(xì)菌保存時(shí)間較長(zhǎng)，可重新劃平板，通過(guò)重新轉(zhuǎn)化細(xì)菌的方式獲取可用菌種。3病毒的稀釋、分裝與保存 1.病毒稀釋操作對(duì)病毒進(jìn)行稀釋時(shí)，先將病毒置于冰浴中融解，之后用 PBS 緩沖液進(jìn)行稀釋，混合均勻后分裝使用。2.避免反復(fù)凍融反復(fù)凍融會(huì)導(dǎo)致病毒滴度降低，每次凍融操作可能使滴度下降 10%，因此在病毒使用過(guò)程中需竭力避免此操作。建議在獲取病毒后，依據(jù)每次的實(shí)際使用量進(jìn)行分裝處理。3.病毒保存要點(diǎn)病毒液通常需在 - 80℃條件下進(jìn)行保存，在 6 個(gè)月內(nèi)，病毒滴度不會(huì)出現(xiàn)顯著下降，。若保存時(shí)間超過(guò) 6-12 個(gè)月，在進(jìn)行實(shí)驗(yàn)前需重新測(cè)定病毒滴度。病毒使用時(shí)，從 - 80℃冰箱取出病毒后，需置于冰上進(jìn)行融解，隨后即可備用。若一次使用后仍有剩余，剩余病毒液可存放于 4℃冰箱，但需在一周內(nèi)完成使用。 |
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