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畢合生物2024銅蟲 (小有名氣)
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[交流]
色譜定量的四大方法，實驗小白也能輕松掌握
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做色譜實驗，定量分析可是關鍵一步！色譜定量的四大方法，讓你的實驗結果又準又穩(wěn)。 1️⃣ 色譜定量的“秘密武器” 色譜定量主要依賴兩個關鍵依據： 檢測器的線性響應關系：大多數色譜檢測器（除了FPD）都遵從線性響應，即檢測器響應信號的大小與單位時間到達檢測器的被測物質的總量成正比。用公式表示就是：m = KS，其中m是待測物質的量，K是線性響應系數，S是檢測器響應信號的值。 塔板理論：塔板理論闡述了峰高與進樣量之間的關系，它們是成正比的。也就是說，峰高和峰面積都與進樣總量成正比，但峰面積的代表性更好，因為峰形經常不完全滿足正態(tài)分布，而峰面積在大多數情況下都能很好地代表待測物質的總量。 2️⃣ 四大定量方法大比拼 ① 歸一化法 歸一化法是把所有出峰的組分含量之和按100%計的定量方法。這種方法特別適合各成分校正因子一致的情況，優(yōu)點是簡便、準確，特別是進樣量不容易準確控制時，進樣濃度及進樣量的變化對定量結果的影響很小。其他操作條件，如流速、柱溫等變化對定量結果的影響也很小。這種方法在GC（氣相色譜）和HPLC（高效液相色譜）中廣泛應用。 ② 外標法（標準曲線法） 外標法是通過繪制標準工作曲線來進行定量分析的方法。具體步驟是：用標準樣品配制成不同濃度的標準系列，在與欲測組分相同的色譜條件下，等體積準確量進樣，測量各峰的峰面積或峰高，用峰面積或峰高對樣品濃度繪制標準工作曲線。標準工作曲線應是通過原點的直線。如果標準工作曲線不通過原點，說明測定方法存在系統誤差。外標法的優(yōu)點是操作簡單，適合大量樣品分析，但缺點是對色譜條件的穩(wěn)定性要求較高，容易出現較大誤差。 ③ 內標法 內標法是選擇適宜的物質作為欲測組分的參比物，定量加到樣品中去，依據欲測組分和參比物在檢測器上的響應值（峰面積或峰高）之比和參比物加入的量進行定量分析的方法。內標法的關鍵是選擇合適的內標物，內標物應是原樣品中不存在的純物質，性質應盡可能與欲測組分相近，不與被測樣品起化學反應，同時要能完全溶于被測樣品中。內標法的優(yōu)點是進樣量的變化和色譜條件的微小變化對定量結果的影響不大，特別適合樣品前處理過程中欲測組分可能發(fā)生變化的情況。缺點是選擇合適的內標物比較困難，操作較麻煩。 ④ 標準加入法 標準加入法實質上是一種特殊的內標法，是在選擇不到合適的內標物時，以欲測組分的純物質為內標物，加入到待測樣品中，然后在相同的色譜條件下，測定加入欲測組分純物質前后欲測組分的峰面積（或峰高），從而計算欲測組分在樣品中的含量的方法。標準加入法的優(yōu)點是不需要另外的標準物質作內標物，只需欲測組分的純物質，進樣量不必十分準確，操作簡單。缺點是要求加入欲測組分前后兩次色譜測定的色譜條件完全相同，否則將引起分析測定的誤差。 3️⃣ 選擇合適的方法 歸一化法：適合各成分校正因子一致，進樣量難以控制的情況。 外標法：適合大量樣品分析，色譜條件穩(wěn)定的情況。 內標法：適合樣品前處理過程中欲測組分可能發(fā)生變化的情況。 標準加入法：適合無法精確進樣，且無法選擇合適內標物的情況。 畢合生物提供服務內容：分子生物學、免疫, 重組蛋白及ELISA相關、活性小分子化合物、高端化學、材料化學、細胞資源庫與培養(yǎng)相關、生命科學、天然產物 |
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