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畢合生物2024銅蟲 (小有名氣)
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[交流]
倒平板，微生物實驗的“地基”
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微生物實驗里，“倒平板”可是基礎(chǔ)操作！教你避開那些常見的坑，讓實驗成功率蹭蹭往上漲！ 1️⃣ 培養(yǎng)基溫度：45℃ - 50℃是關(guān)鍵 倒平板時，培養(yǎng)基的溫度超重要！一般固體培養(yǎng)基傾注的溫度得在45℃ - 50℃之間。為啥呢？因為瓊脂是培養(yǎng)基的主要凝固劑，它的凝固溫度大概在40℃左右。要是培養(yǎng)基溫度過高，瓊脂還保持著液態(tài)，倒進培養(yǎng)皿后，凝固時間就會拖得很長，而且很可能凝固不均勻，后續(xù)實驗操作就麻煩了。而且溫度高了，培養(yǎng)皿蓋上容易產(chǎn)生大量冷凝水，這些冷凝水要是滴到平皿里，菌層分布就會被干擾，尤其像做抑菌圈測定這種實驗，冷凝水一多，抑菌圈都不準(zhǔn)了。反過來，要是培養(yǎng)基溫度過低，瓊脂已經(jīng)開始凝固，培養(yǎng)基就會變得黏糊糊的，很難均勻地倒進培養(yǎng)皿，最后形成的平板凹凸不平，微生物生長和分布也會受影響。 要是發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)基溫度不對，比如過高，可以用手心輕輕碰一下裝培養(yǎng)基的三角瓶，感覺不燙，再用手背試試，手背感覺燙手，那溫度大概在50℃左右，這時候倒平板最合適。要是培養(yǎng)基已經(jīng)開始凝固，可千萬別硬著頭皮倒平板，得趕緊封口，用微波爐或者電磁爐重新加熱，讓它溶解后再冷卻到45℃ - 50℃，接著再倒平板。 2️⃣ 防止冷凝水：這幾個小技巧超實用 冷凝水是倒平板時的“大敵”，它會影響實驗結(jié)果的準(zhǔn)確性。為了避免冷凝水的形成，可以在培養(yǎng)基溫度降到45℃ - 50℃的時候開始倒平板，這時候水蒸氣蒸發(fā)得慢，冷凝水也會少一些。還有幾種預(yù)防冷凝水的辦法。比如倒平板的時候把培養(yǎng)皿蓋打開，等全部倒完，把培養(yǎng)皿放在超凈臺里讓它自然凝固5分鐘，再關(guān)上皿蓋，倒過來放，這樣冷凝水就少了。或者把培養(yǎng)皿完全打開，等培養(yǎng)基凝固后再關(guān)蓋，這種方法雖然不太嚴(yán)謹(jǐn)，但實際操作中效果還不錯。再就是傳統(tǒng)的壘疊法，倒培養(yǎng)基的時候，把培養(yǎng)皿一個接一個壘起來，靜置直到全部凝固，然后再倒置備用。這樣除了最上面的培養(yǎng)皿蓋可能會有冷凝水，其他都不會有。要是最上面的平板倒好后，放個熱水三角瓶或者熱水平皿在上面，也能防止冷凝水。 3️⃣ 防止氣泡：這些細(xì)節(jié)要注意 氣泡也是倒平板時常見的問題，主要是因為培養(yǎng)基在搖勻的時候帶進了空氣。要是想避免氣泡，可以在滅菌之前確保瓊脂粉充分溶解。要是滅菌完了發(fā)現(xiàn)瓊脂粉分布不均勻，需要搖勻，那最好在溫度高的時候搖，這時候氣泡會隨著溫度升高上升并自動消泡，但這方法有點危險，得小心操作�；蛘叩扰囵B(yǎng)基溫度降到50℃ - 60℃的時候，輕輕沿著壁搖勻，讓培養(yǎng)基整體沿著同一個方向搖動，直到完全均勻為止。要是滅菌后要加抗生素之類的試劑，記得在培養(yǎng)基溫度降到45℃ - 50℃的時候加進去，然后輕輕沿著壁搖勻。要是已經(jīng)冒出了很多氣泡，而且消不掉，那就用微波爐之類的加熱設(shè)備重新加熱，讓氣泡從培養(yǎng)基里跑出來。 4️⃣ 培養(yǎng)基厚度：根據(jù)實驗需求來調(diào)整 培養(yǎng)基的厚度會影響微生物的生長和分布，所以得根據(jù)實驗需求來調(diào)整。拿90mm直徑的培養(yǎng)皿來說，它的內(nèi)高度大概在14 - 15mm，能盛100mL水。倒平板的時候，一般用20 - 25mL的培養(yǎng)基。其中，20mL的培養(yǎng)基高度大概在3mm左右，25mL的培養(yǎng)基高度大概在4mm左右�？梢愿鶕�(jù)培養(yǎng)基的體積和培養(yǎng)皿的尺寸來大致確定培養(yǎng)基的厚度。其實也可以靠經(jīng)驗來掌握培養(yǎng)基的倒入量，倒平板的時候，先鋪滿整個培養(yǎng)皿底部，然后再稍微多倒一點，差不多就能控制在20mL左右；如果再多倒一點，就能達到25mL左右。多練幾次，就能更準(zhǔn)確地控制培養(yǎng)基的厚度了。 5️⃣ 實操小貼士：快速倒平板，減少暴露時間 倒平板的過程中，操作手法和步驟也會影響冷凝水的形成。以下是一些具體的操作技巧： 快速倒平板：在培養(yǎng)基溫度降至45℃ - 50℃時，迅速將培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)皿中，并立即輕輕晃動培養(yǎng)皿，使培養(yǎng)基均勻鋪滿底部。這樣可以減少培養(yǎng)基在培養(yǎng)皿中停留的時間，從而減少水分蒸發(fā)。 避免長時間暴露：在倒平板時，盡量減少培養(yǎng)皿蓋的打開時間�？梢圆捎靡韵路椒ǎ� 快速操作：在倒培養(yǎng)基時，迅速打開培養(yǎng)皿蓋，倒入培養(yǎng)基后立即蓋上皿蓋。 分步操作：如果需要多次倒平板，可以先將培養(yǎng)皿蓋打開，依次倒入培養(yǎng)基后，再統(tǒng)一蓋上皿蓋。這樣可以減少培養(yǎng)皿蓋暴露在空氣中的時間，從而減少冷凝水的形成。 畢合生物提供服務(wù)內(nèi)容：分子生物學(xué)、免疫, 重組蛋白及ELISA相關(guān)、活性小分子化合物、高端化學(xué)、材料化學(xué)、細(xì)胞資源庫與培養(yǎng)相關(guān)、生命科學(xué)、天然產(chǎn)物 |
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