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云云寸明新蟲(chóng) (初入文壇)
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[求助]
引物設(shè)計(jì) 已有1人參與
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我想知道設(shè)計(jì)引物的時(shí)候引物如果包含同源臂 那么看GC含量的時(shí)候是需要看后面p的片段的引物?同源臂的引物整個(gè)的呢還是說(shuō)只需要看要p的那個(gè)片段的20個(gè)nt的，不需要看同源臂的20個(gè)nt呢？ 發(fā)自小木蟲(chóng)IOS客戶(hù)端 |
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鐵蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)
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【答案】應(yīng)助回帖
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
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主要看后面擴(kuò)增基因?qū)?yīng)的引物序列，如果GC含量太高，引物容易結(jié)合模板非特異片段，擴(kuò)增出雜帶，如果GC含量太低，結(jié)合力弱，容易擴(kuò)增失敗；前面同源片段的GC含量也比較重要，如果GC含量太高，也容易將引物結(jié)合到非特定位置，導(dǎo)致擴(kuò)增失��； 正常實(shí)驗(yàn)不需要考慮這么多，如果擴(kuò)增出現(xiàn)問(wèn)題，就先用不帶同源臂的擴(kuò)增特定基因，然后以擴(kuò)增出基因?yàn)槟０澹眉恿送幢鄣囊飻U(kuò)增，可以避免特異性差的問(wèn)題。 |
2樓2025-07-30 14:49:42
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