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畢合生物2024銅蟲 (小有名氣)
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[交流]
細胞傳代別硬剛！手把手教你零翻車秘籍
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辛辛苦苦養(yǎng)大的細胞，一傳代就團滅？這篇直接把“細胞殺手”變“細胞奶媽”，全程高能～ 傳代前靈魂三問 細胞狀態(tài)OK嗎？ 70-90%匯合度+梭形/多邊形+透亮才是傳代黃金期，密度太低餓肚子，太高擠到變形家伙什齊了嗎？ 37℃預熱的胰酶、PBS、新鮮培養(yǎng)基、無菌離心管、酒精燈統統就位，缺一都別開工無菌氛圍到位了嗎？ 臺面75%酒精擦三遍+紫外燈照30min+手套口罩焊臉上，別讓雜菌蹭熱度 六步傳代法，一步一驚喜 Step1 溫柔棄舊液輕拍培養(yǎng)瓶讓細胞松動，傾斜瓶身讓廢液“滑滑梯”進廢液缸，動作要快姿勢要帥～ Step2 PBS洗刷刷沿壁緩慢注入PBS，輕輕晃兩圈洗掉殘余血清，倒掉時記得留“眼淚”別沖走細胞哦 Step3 精準加胰酶37℃胰酶像面膜一樣均勻覆蓋細胞層，送回培養(yǎng)箱孵育1-5min，顯微鏡下看到細胞變圓、邊緣卷起立刻終止，拖延癥會害死它們！ Step4 培養(yǎng)基急剎車兩倍體積的新鮮培養(yǎng)基“嘩啦”倒進去，血清瞬間中和胰酶，用移液槍溫柔吹打10-15次，細胞瞬間化身“細胞雨” Step5 離心大作戰(zhàn)1000rpm離心5min，上清瀟灑倒掉，管底沉淀像“細胞小丸子”，輕彈管壁讓它們松散開～ Step6 新家入住儀式按1:2到1:5比例稀釋到新培養(yǎng)瓶，輕輕搖勻讓細胞“躺平”，放回37℃、5%CO₂培養(yǎng)箱，1-2h后補加新鮮培養(yǎng)基，儀式感滿滿 傳代后72小時黃金觀察期 24h 顯微鏡下看貼壁情況，漂著的細胞可能是消化過度or接種密度低的“小可憐”48h 換新鮮培養(yǎng)基，顏色變黃說明細胞開心到代謝爆表，及時補充營養(yǎng)72h 記錄生長曲線和形態(tài)變化，發(fā)現異常立刻排查污染or培養(yǎng)條件 翻車現場急救包 細胞抱團不分散？ 吹打時力度過大or胰酶量不足，下次加個“輕柔吹打20次”buff 貼壁率低于50%？ 檢查培養(yǎng)瓶是否包被、血清批次是否穩(wěn)定，必要時上多聚賴氨酸“防滑墊” 傳代后大批死亡？ 離心轉速過高/時間過長是元兇，降到800rpm+3min試試“溫柔離心術” 畢合生物提供服務內容：分子生物學、免疫, 重組蛋白及ELISA相關、活性小分子化合物、高端化學、材料化學、細胞資源庫與培養(yǎng)相關、生命科學、天然產物 |
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