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生物前沿研究室新蟲 (小有名氣)
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[交流]
小鼠解剖&取血清｜血淚教訓(xùn)總結(jié)
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一、解剖前準備：細節(jié)決定成敗 ?器材消毒要徹底：鑷子、剪刀等工具若消毒不徹底比如只用酒精擦拭卻沒灼燒，可能污染樣本，之前有次沒燒鑷子，結(jié)果血清檢測時出現(xiàn)細菌污染，實驗直接報廢 ?小鼠禁食需注意：取血前建議禁食12小時，但別禁水曾有回忘禁水，小鼠脫水導(dǎo)致血液黏稠，心臟取血時血流不暢，血清量少了一半 ?固定姿勢別馬虎：仰臥固定時四肢一定要綁牢，試過只綁前肢，小鼠掙扎時踢到操作臺，不僅取血失敗，還差點讓小鼠受傷 二、取血清關(guān)鍵步驟：手穩(wěn)+時機把控 ?取血部位選對嗎 ?眼眶后靜脈叢取血：新手慎選！角度沒找對太靠內(nèi)，曾戳到小鼠眼球，不僅出血少，還影響后續(xù)實驗倫理審查 ?心臟取血：一定要等小鼠深度麻醉捏腳趾沒反應(yīng)，再操作有次麻醉淺了，小鼠突然抽搐，針頭戳偏，心臟破了血都流到胸腔里，血清根本沒法收集 ?血清分離時機：采血后別直接離心！先讓血液在室溫凝固30分鐘用牙簽輕輕劃開血凝塊更好，試過剛采血就離心血清里全是纖維蛋白，離心后上層都是絮狀物，檢測數(shù)據(jù)全錯 三、常見翻車現(xiàn)場：這些錯誤別再犯 ?溶血毀所有 ?采血時針頭反復(fù)穿刺血管如心臟取血扎了兩次，紅細胞破裂導(dǎo)致血清呈粉紅色，測生化指標時谷丙轉(zhuǎn)氨酶數(shù)值直接飆高，數(shù)據(jù)全廢 ?離心速度太高，超過3000轉(zhuǎn)/分或離心管沒平衡，曾有次離心后血清分層不清下層全是紅細胞碎片，只能重取 ?樣本混淆災(zāi)難：同時做多個小鼠實驗時，一定要用不同顏色標簽紙標記，如1號鼠紅色、2號鼠藍色，有回忘貼標簽最后分不清哪管血清對應(yīng)哪只鼠，實驗重做不說小鼠也遭罪 四、倫理與安全：別忽視的細節(jié) ?處死方式合規(guī)性：頸椎脫臼法要確保一次成功，新手操作不熟練時（比如力度不夠）小鼠會持續(xù)掙扎，不僅違反動物倫理，還可能導(dǎo)致取血時應(yīng)激激素升高，影響血清激素水平檢測結(jié)果 ?生物安全防護：血清樣本若不慎濺到手套上，別直接用手擦臉！曾有同事沒注意，摘手套時蹭到眼皮，雖然小鼠健康，但事后想起來還是后怕，一定要及時用碘伏消毒 五、高效技巧：老司機私藏經(jīng)驗 ?取血前用37℃暖燈照小鼠腹部1分鐘，血管會更充盈，心臟取血時進針后能看到明顯回血，成功率翻倍 ?血清分裝時用帶濾芯的吸頭，避免吸取底層細胞碎片，分裝后立即凍在-80℃，別反復(fù)凍融（試過凍融3次，ELISA檢測時背景值高到無法分析） 做好這些細節(jié)，既能提高實驗成功率，也能減少小鼠痛苦你在操作中遇到過哪些難題？可以聊聊，幫你分析怎么破局！ 發(fā)自小木蟲IOS客戶端 |
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