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Biacore™ 8K SPR系統(tǒng)弱相互作用檢測(cè)的幾點(diǎn)技術(shù)思考 已有1人參與
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最近在使用Biacore 8K SPR系統(tǒng)進(jìn)行弱親和力分子互作檢測(cè)時(shí)（KD~10⁻⁴M量級(jí)），遇到幾個(gè)值得深入探討的技術(shù)問題。這類高靈敏度檢測(cè)對(duì)系統(tǒng)參數(shù)設(shè)置提出了特殊要求，想和大家交流下經(jīng)驗(yàn)。 在緩沖液體系選擇方面，發(fā)現(xiàn)DMSO濃度超過3%時(shí)，雖然能改善小分子溶解度，但會(huì)導(dǎo)致Biacore™ 8K SPR系統(tǒng)的參考通道出現(xiàn)明顯基線漂移。對(duì)比測(cè)試顯示，添加0.05% Tween-20的PBS緩沖體系在長時(shí)程實(shí)驗(yàn)中穩(wěn)定性更好。 關(guān)于配體固定化策略，Biacore™ 8K SPR系統(tǒng)的高靈敏度檢測(cè)能力使得低密度固定化（<5000RU）成為可能。不過實(shí)際操作中發(fā)現(xiàn)，過低的固定化密度會(huì)顯著降低弱相互作用信號(hào)的信噪比。如何在質(zhì)量傳輸效應(yīng)和信號(hào)強(qiáng)度之間找到平衡點(diǎn)，可能需要針對(duì)不同分子體系進(jìn)行優(yōu)化。 溫度控制是另一個(gè)值得注意的因素。在4℃條件下，Biacore™ 8K SPR系統(tǒng)檢測(cè)某些疏水相互作用時(shí)響應(yīng)值比常溫條件提高15-20%，但需要特別注意冷凝問題。有同行嘗試過在樣品艙加裝局部溫控模塊來改善這個(gè)問題嗎？ 這些在弱相互作用檢測(cè)中積累的經(jīng)驗(yàn)，或許對(duì)其他使用Biacore™ 8K SPR系統(tǒng)的研究者有所啟發(fā)。歡迎大家一起探討更多優(yōu)化方案，比如再生條件的選擇對(duì)配體穩(wěn)定性的影響等。 |
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2樓2025-11-05 09:43:08
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