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畢合生物2024銅蟲 (小有名氣)
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從零開始教你養(yǎng)細(xì)菌，一文掌握細(xì)菌培養(yǎng)核心要點(diǎn)
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實(shí)驗(yàn)室里那些讓人又愛又恨的細(xì)菌培養(yǎng)。不管是新手小白還是老司機(jī)，這篇攻略都能幫你少走彎路，快拿小本本記下來吧📝！ 細(xì)菌培養(yǎng)的重要性 細(xì)菌培養(yǎng)在生物化學(xué)與分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)里可是個(gè)大熱門，比如基因克隆與表達(dá)、DNA與RNA的提取、酶的生產(chǎn)、細(xì)菌與細(xì)胞共培養(yǎng)等等。今天就以大腸桿菌（生長周期短）和鳥分枝桿菌（生長周期長）為例，給大家講講細(xì)菌培養(yǎng)的核心要點(diǎn)。 實(shí)驗(yàn)步驟 1️⃣準(zhǔn)備工作 培養(yǎng)基準(zhǔn)備：大腸桿菌用LB培養(yǎng)基，鳥分枝桿菌用Middlebrook培養(yǎng)基。 試劑準(zhǔn)備：蛋白胨、酵母提取物、氯化鈉、瓊脂、抗生素（氨芐青霉素、羧芐青霉素、兩性霉素B）等。 儀器、耗材準(zhǔn)備：細(xì)菌培養(yǎng)皿、50mL無菌離心管、試管、錐形瓶、接種環(huán)、酒精燈、高壓蒸汽滅菌鍋、37℃恒溫培養(yǎng)箱、生物安全柜、超凈工作臺、恒溫?fù)u床。 2️⃣實(shí)驗(yàn)步驟 （1）滅菌 配置培養(yǎng)基后，用高壓蒸汽滅菌法121℃、30min滅菌。把培養(yǎng)皿、離心管、錐形瓶、接種環(huán)、酒精燈等放在超凈工作臺，紫外線照射至少30min。 （2）倒平板 根據(jù)細(xì)菌生長狀況設(shè)置平板厚度。大腸桿菌10mL/平板（約3-4mm厚），鳥分枝桿菌20mL/平板（約5-6mm厚）。 （3）活化、接種 菌種來源可以是平板或-80℃保存的菌種。關(guān)閉紫外線，打開超凈工作臺通風(fēng)，點(diǎn)燃酒精燈，灼燒接種環(huán)至紅色，冷卻后挑取適量菌落或菌液劃線，使菌液從多到少分布在培養(yǎng)基表面。 （4）培養(yǎng) 用封口膜封好培養(yǎng)基，正置37℃恒溫培養(yǎng)箱30min左右，然后倒置培養(yǎng)。 （5）觀察 大腸桿菌一般12~16h觀察生長狀況，鳥分枝桿菌生長緩慢，需要1~4周左右。 （6）液體培養(yǎng) 挑取單菌落進(jìn)行擴(kuò)大培養(yǎng)。將液體培養(yǎng)基倒入無菌離心管或試管，灼燒接種環(huán)滅菌冷卻后將菌落挑取伸入試管輕輕晃動(dòng)，使菌落落入液體培養(yǎng)基，封口膜封閉試管或離心管，放置恒溫?fù)u床培養(yǎng)。 注意事項(xiàng) 無菌操作：所有物品和操作都要求無菌，防止雜菌污染。 調(diào)節(jié)pH值：滅菌前調(diào)節(jié)培養(yǎng)基pH值，LB培養(yǎng)基要求pH值在7.0~7.4之間。 充分溶解：培養(yǎng)基配置時(shí)，用蒸餾水充分溶解。 冷卻后加入抗生素：抗生素、增菌液在培養(yǎng)基稍稍冷卻至手可以正常觸碰時(shí)加入，防止抗生素失效。 操作位置：所有物品放置在酒精燈周圍，倒平板時(shí)注意操作順序。 防止水汽：平板半敞開在酒精燈周圍或疊放在酒精燈旁邊，防止產(chǎn)生水汽。 特殊處理：鳥分枝桿菌生長周期長，需加入增菌液、抗生素，倒厚平板。 安全防護(hù)：鳥分枝桿菌有一定感染性，使用前60℃水浴滅活30min，操作時(shí)在生物安全柜中進(jìn)行。 個(gè)人防護(hù)：實(shí)驗(yàn)操作過程中佩戴好手套、口罩、穿好實(shí)驗(yàn)服。 標(biāo)記平板：標(biāo)記好時(shí)間、菌種名稱、培養(yǎng)條件等。 畢合生物提供服務(wù)內(nèi)容：分子生物學(xué)、免疫, 重組蛋白及ELISA相關(guān)、活性小分子化合物、高端化學(xué)、材料化學(xué)、細(xì)胞資源庫與培養(yǎng)相關(guān)、生命科學(xué)、天然產(chǎn)物 |
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