 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 1 | 1/1 | 返回列表 |
| 查看: 768 | 回復: 0 | |||
畢合生物2024銅蟲 (小有名氣)
|
[交流]
質粒轉化后涂板總是糊成一片？別慌，這里有妙招
|
|
實驗室里那些讓人頭大的事兒，質粒轉化后涂板總是糊成一片，這可咋整？別急，跟著我一起看看解決方法吧！ 為啥會糊成一片 1️⃣轉化效率過高 有時候，感受態(tài)細胞質量太好，質粒濃度又高，轉化條件還控制得當，轉化效率就蹭蹭往上漲。比如熱激轉化法，熱激溫度過高或時間過長，細胞膜通透性增加，質粒就像“不請自來”的客人，一股腦兒全進去了，轉化效率自然就高了。這就導致細胞濃度過高，涂布時菌落擠在一起，糊成一片。 2️⃣涂布操作有問題 涂布棒要是沒在酒精燈火焰上充分滅菌，或者涂布時用力不均勻，細胞在培養(yǎng)基上分布就不均勻。涂布面積要是過小，細胞過于集中，菌落也會糊成一片。涂布面積應該根據(jù)細胞濃度調整，細胞濃度高時，涂布面積得適當增大。 3️⃣培養(yǎng)基質量不行 瓊脂含量過低，培養(yǎng)基凝固性不好，細胞在培養(yǎng)過程中容易移動，菌落就會糊成一片。營養(yǎng)成分不足或不均衡，細胞生長代謝受影響，菌落形成也會受影響。比如培養(yǎng)基中缺乏某種必需營養(yǎng)物質，細胞生長速度可能減慢，但細胞間相互作用可能增強，菌落就會糊成一片。 4️⃣培養(yǎng)條件不合適 培養(yǎng)溫度過高或過低，細胞生長速度會加快或減慢，菌落形成受影響。培養(yǎng)時間過長，細胞生長代謝不斷進行，細胞間相互作用增強，菌落也會糊成一片。 解決方法 1️⃣稀釋細胞懸液 把轉化后的細胞懸液適當稀釋就行。涂布前，取點轉化后的細胞懸液，加點無菌生理鹽水或其他稀釋液，稀釋倍數(shù)先從10倍、100倍開始試試，再根據(jù)涂布后的菌落分布情況調整。稀釋后的懸液再涂布，這樣菌落就能清晰分開了。 2️⃣規(guī)范涂布操作 涂布棒得徹底滅菌，不然殘留的微生物或雜質會干擾細胞分布。涂布時用力要均勻，讓細胞在培養(yǎng)基上均勻分布。涂布面積也不能太小，不然細胞太集中，菌落還是會糊。涂布后，最好讓培養(yǎng)基表面的液體稍微干一下再培養(yǎng)，這樣能減少細胞在培養(yǎng)過程中的移動。 3️⃣檢查培養(yǎng)基質量 瓊脂含量不足，培養(yǎng)基凝固性差，細胞容易移動，菌落就糊了。配制培養(yǎng)基時，要嚴格按照配方稱量瓊脂，確保培養(yǎng)基充分煮沸和滅菌，讓瓊脂完全溶解。培養(yǎng)基的營養(yǎng)成分也得均衡，不然細胞生長代謝受影響，菌落也長不好。要是懷疑培養(yǎng)基有問題，就重新配制或換新的培養(yǎng)基試試。 4️⃣優(yōu)化培養(yǎng)條件 溫度過高或過低，細胞生長代謝都會受影響，菌落也長不好。大腸桿菌最適培養(yǎng)溫度是37℃左右，溫度高了，細胞代謝加快，細胞間相互作用增強，菌落就糊了；溫度低了，細胞生長慢，菌落也不清晰。所以，培養(yǎng)箱的溫度得設置準確，還要定期檢查溫度是否穩(wěn)定。培養(yǎng)時間也得控制好，時間太長，細胞過度生長，菌落就會重疊。涂布后的培養(yǎng)時間一般根據(jù)細胞生長速度和實驗要求調整，通常在12到24小時之間。 稀釋細胞懸液的技巧 初步稀釋倍數(shù)選擇 10倍稀釋：這是最常用的起始稀釋倍數(shù)。通過將100微升細胞懸液加入到900微升無菌生理鹽水或LB培養(yǎng)基中，可以得到10倍稀釋的溶液。如果涂布后菌落仍然過于密集，可以進一步稀釋。 100倍稀釋：如果10倍稀釋后菌落仍然糊成一片，可以嘗試100倍稀釋。即取100微升細胞懸液加入到9.9毫升無菌生理鹽水或LB培養(yǎng)基中。 1000倍稀釋：在某些情況下，如果轉化效率非常高，可能需要進行1000倍稀釋。取100微升細胞懸液加入到99.9毫升無菌生理鹽水或LB培養(yǎng)基中。 判斷稀釋倍數(shù)是否合適 涂布后的菌落觀察：涂布后，理想的菌落分布應該是單個菌落清晰可辨，且分布均勻。如果菌落仍然糊成一片，說明稀釋倍數(shù)不夠；如果菌落過于稀疏，說明稀釋倍數(shù)過大。 經(jīng)驗參考：一般來說，對于常見的大腸桿菌轉化實驗，10倍到100倍稀釋通常能夠滿足大多數(shù)情況。如果使用的是高效率的轉化方法（如化學轉化或電轉化），可能需要更高的稀釋倍數(shù)（如1000倍）。 逐步稀釋法 為了更精確地確定合適的稀釋倍數(shù)，可以采用逐步稀釋法。例如： 10倍稀釋：取100微升細胞懸液加入到900微升無菌生理鹽水中，得到10倍稀釋液。 100倍稀釋：從10倍稀釋液中取100微升，再加入到900微升無菌生理鹽水中，得到100倍稀釋液。 1000倍稀釋：從100倍稀釋液中取100微升，再加入到900微升無菌生理鹽水中，得到1000倍稀釋液。 分別涂布：將不同稀釋倍數(shù)的細胞懸液分別取100微升涂布在培養(yǎng)基上，觀察菌落分布情況，選擇菌落分布最合適的稀釋倍數(shù)。 特殊情況 低轉化效率：如果轉化效率較低，可能不需要稀釋，直接涂布即可。 高轉化效率：如果轉化效率非常高（如使用了高效感受態(tài)細胞或電轉化方法），可能需要更高的稀釋倍數(shù)（如1000倍甚至更高）。 不同質粒和宿主菌：不同的質粒和宿主菌的轉化效率可能不同，需要根據(jù)具體實驗條件進行調整。 畢合生物提供服務內容：分子生物學、免疫, 重組蛋白及ELISA相關、活性小分子化合物、高端化學、材料化學、細胞資源庫與培養(yǎng)相關、生命科學、天然產(chǎn)物 |
回復此樓» 猜你喜歡
伙伴們，祝我生日快樂吧
已經(jīng)有5人回復
-
274求調劑0856材料化工
已經(jīng)有10人回復
-
337一志愿華南理工0805材料求調劑
已經(jīng)有6人回復
-
（081700）化學工程與技術-298分求調劑
已經(jīng)有7人回復
-
材料與化工304求B區(qū)調劑
已經(jīng)有5人回復
-
NSFC申報書里申請人簡歷中代表性論著還需要在申報書最后的附件里面再上傳一遍嗎
已經(jīng)有9人回復
-
一志愿北京化工大學材料與化工296分求調劑
已經(jīng)有17人回復
-
0703化學一志愿211 總分320求調劑
已經(jīng)有3人回復
-
0703求調劑
已經(jīng)有6人回復
-
一志愿天津大學材料與化工275求調劑
已經(jīng)有22人回復
» 本主題相關商家推薦: (我也要在這里推廣)
相關版塊跳轉
我要訂閱樓主 畢合生物2024 的主題更新
| 1 | 1/1 | 返回列表 |
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 材料與化工304求B區(qū)調劑 +4 | 邱gl 2026-03-11 | 5/250 |
|
|---|---|---|---|---|
|
[考博] 售SCI一區(qū)T0P文章，我:8.O.5.5.1.O.5.4,科目齊全,可+急 +3 | 7x4iz20zqa 2026-03-11 | 8/400 |
|
|
|
[考博] 讀博申請 +5 | 感dd 2026-03-10 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 材料工程307，求調劑 +7 | 我要燃燒你的夢 2026-03-08 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 282分材料專業(yè)求調劑院校 +16 | 楓橋ZL 2026-03-09 | 23/1150 |
|
|
|
[考研] 298求調劑 +3 | Vv呀！ 2026-03-10 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 086000生物與醫(yī)藥319分求調劑 +4 | Tolkien 2026-03-07 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 0817學碩華東區(qū)求調劑 +3 | 30660438 2026-03-08 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 327分求調劑086 +4 | 西紅柿?小帥 2026-03-09 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 求調劑 一志愿蘇州大學，0856化工323分 | 本科應化 | 有專利/競賽/科研助手經(jīng)歷 | +7 | 橙子cyx 2026-03-06 | 9/450 |
|
|
|
[考博] 2026博士申請 +6 | 起泡酒 2026-03-08 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 294 英二數(shù)二物化 求調劑 +6 | 米飯團不好吃 2026-03-09 | 6/300 |
|
|
|
[考研]
 295復試調劑
+4
|
簡木ChuFront 2026-03-09 | 4/200 |
|
|
|
[碩博家園] 2026級碩士研究生招生/調劑 +3 | 知足常樂的樂 2026-03-06 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 0817找調劑 +6 | kk扛 2026-03-08 | 6/300 |
|
|
|
[教師之家] 交大前校長王樹國：現(xiàn)在最先進的科技并不在大學實驗室，而是在企業(yè)研究院 +4 | zju2000 2026-03-08 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 288求調劑（0703）一志愿東北大學 +5 | 好好- 2026-03-07 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 303求調劑 +8 | forgman95 2026-03-05 | 10/500 |
|
|
|
[考研] 一志愿211 085600 280數(shù)二英二求調劑 +3 | 月山斜 2026-03-06 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 復試調劑 +5 | 呼呼？~+123456 2026-03-05 | 5/250 |
|