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夏末～易科新蟲 (小有名氣)
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小鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞分離
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骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞分離 有需要做骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞分離的可以看過來。 1.采用脊椎脫臼或者戊巴比妥麻醉處死小鼠，使用75%酒精對小鼠進(jìn)行消毒（可采用逆毛發(fā)噴濕或直接浸泡的方法），消毒后放入超靜工作臺或生物安全柜。2.用剪刀在小鼠背部橫向剪開，直接用手將皮膚剝離，直到后爪，此處無法畫全）。 3.用剪刀沿著脛骨和股骨將大部分的肌肉剝離，用手抓著股骨往上拉，另一只手拿著剪刀卡在股骨與盆骨之間，找到空隙將后肢分離。 4.一只手捏著脛骨，另一只手拿著剪刀卡在脛骨與后掌中間的空隙，輕輕分離腳掌注意這些關(guān)節(jié)部位的分離不需要用力剪，只需要多嘗試找到關(guān)節(jié)空隙就可輕松分離。 5.此時(shí)用彎剪沿著骨頭將大部分肌肉剝離，可用剪刀尖端插入骨頭和肌肉的縫隙中，這樣骨頭上不會殘留太多肌肉殘?jiān)?br /> 6.接下來用剪刀將股骨和脛骨的韌帶挑開，并將股骨與脛骨分離，然后用粗糙的擦手巾將骨頭上多余的肌肉磨掉。 7.將處理干凈的骨頭放入a-MEM空白培養(yǎng)基中備用，所有的骨頭處理完畢后，用剪刀剪開骨骺端，用5ml注射器搭配1ml針頭，用空白培養(yǎng)基沖洗骨內(nèi)腔，待骨髓沖洗至發(fā)白才能結(jié)束。 8.注意可直接在50ml離心管上放一個(gè)70um的細(xì)胞篩，避免骨骼碎片或者細(xì)胞塊掉入。此外有的時(shí)候會直接沖出一條紅色組織，那是紅骨髓，不要丟棄，用1ml槍頭吹散。 9.將收集起來的細(xì)胞懸液直接拿去離心（此時(shí)可進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)），500g/1000 rpm 5min，用a-MEM 10% FBS完全培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，接種到培養(yǎng)瓶中。 10.48h后換液，去除未貼壁細(xì)胞。注意此時(shí)細(xì)胞貼壁還不算牢固，不要用槍頭去吹，只需要晃動培養(yǎng)瓶將未貼壁細(xì)胞懸起來，然后吸除即可，不需要去得特別干凈，之后每2-3天換一次液，大概7-10天可長滿，用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。 發(fā)自小木蟲手機(jī)客戶端 |
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