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[交流]
人外周血PBMC的CD4+ T細胞磁珠分選及流式鑒定
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一、 人外周血單個核細胞（PBMC）的分離 1. 3ml抗凝血加入3ml 1×PBS進行稀釋。 2. 在15ml離心管內(nèi)加入3ml淋巴細胞分離液，再在液面上方平鋪3ml稀釋過的抗凝血，常溫下，水平離心機600g，離心30min。 3. 吸取中間白膜層細胞，加入15ml離心管中，再加入10ml 1×PBS混勻，常溫下，1000rpm，離心10min，棄上清，每管加入2ml MACS緩沖液重懸細胞并計數(shù)，調(diào)整細胞數(shù)量，每個樣本不超過107個細胞。 4. 2000rpm，離心3min，棄上清。 二、 磁珠分選 1. 每管加入40ul MACS緩沖液重懸細胞，再加入10ul CD4+T Cell Biotin-Antibody Cocktail, human，混勻，4℃孵育5min。 2. 每管加入30ul MACS緩沖液，再加入20ul CD4+T Cell MicroBead Cocktail,human，混勻，4℃孵育10min。 3. 將分選柱置于磁力架上，加入3ml MACS緩沖液潤洗柱子，待液體不再流出，更換新的離心管。 4. 將細胞懸液加入分選柱，待液體不再流出，加入3ml MACS緩沖液洗柱子，液體收集完畢，將離心管撤離后，再將分選柱撤下。 5. 將收集到的細胞懸液進行離心，1500rpm，5min，去上清。 三、流式鑒定 |
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