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[交流]
體外消化模擬實驗方案
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人體體外腸胃消化模擬實驗方案。 一、實驗?zāi)康?br /> 模擬人體口腔、胃和小腸的消化過程，評估樣品（如食品、藥物、益生菌等）在消化過程中的物理化學(xué)變化、活性成分釋放率、生物利用率或微生物存活率。 二、實驗材料 1. 試劑 口腔階段 α-淀粉酶（ph 6.9） 人工唾液電解質(zhì)液（含kcl、nacl、cacl₂等） 胃階段 胃蛋白酶（ph 3.0） 人工胃液（含nacl、kcl等） 小腸階段 胰酶（胰蛋白酶、糜蛋白酶等，ph 7.0） 膽鹽（如牛膽酸鈉） 人工腸液（含nahco₃調(diào)節(jié)ph） 其他 pbs緩沖液、naoh/hcl（調(diào)節(jié)ph）、抗氧化劑（如抗壞血酸，可選） 2. 設(shè)備 人體體外腸胃消化模擬設(shè)備: jd-shime-i 三、實驗步驟 1. 口腔階段模擬 條件：37℃，ph 6.9，時間2-5分鐘 操作： 將樣品（固體需粉碎至2 mm顆粒）與人工唾液按混合。 加入α-淀粉酶，混勻混合。 模擬咀嚼運動。 終止反應(yīng)：快速調(diào)節(jié)ph至3.0（進入胃階段）或離心取上清液（僅分析口腔階段）。 2. 胃階段模擬 條件：37℃，ph 3.0，時間2小時 操作： 將口腔消化產(chǎn)物與人工胃液按混合。 加入胃蛋白酶，調(diào)節(jié)ph至3.0。 模擬胃蠕動。 取樣：在0、30、60、120分鐘取樣，立即煮沸5分鐘滅活酶（或調(diào)節(jié)ph至7.0終止反應(yīng)）或使用jd-shime-i自動分析功能。 3. 小腸階段模擬 條件：37℃，ph 7.0，時間2-4小時 操作： 將胃消化產(chǎn)物與人工腸液按混合。 加入胰酶和膽鹽，調(diào)節(jié)ph至7.0。 模擬腸道蠕動。 取樣：在0、60、120、240分鐘取樣，離心（10,000 g，10分鐘）取上清液分析或使用jd-shime-i自動分析功能。 四、關(guān)鍵參數(shù)控制 ph調(diào)節(jié)：精確控制各階段ph。 酶活性驗證：定期檢測酶活性。 氧控制：厭氧環(huán)境可模擬腸道厭氧條件（針對益生菌實驗）。 五、數(shù)據(jù)分析 檢測指標（根據(jù)實驗?zāi)繕诉x擇） 理化性質(zhì)：粒徑（動態(tài)光散射）、zeta電位、黏度。 成分釋放率：hplc/uplc檢測目標成分（如多酚、藥物活性成分）。 微生物存活率：平板計數(shù)法（益生菌）、熒光染色（活/死細胞區(qū)分）。 消化產(chǎn)物：sds-page分析蛋白質(zhì)水解程度；dns法測還原糖釋放量。 [ last edited by 小冀- on 2025-5-8 at 09:08 ] [ Last edited by 小冀- on 2025-5-8 at 09:08 ] |
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