 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 1 | 1/1 | 返回列表 |
| 查看: 2299 | 回復(fù): 0 | |||
生物前沿研究室新蟲(chóng) (小有名氣)
|
[交流]
wb實(shí)驗(yàn)應(yīng)該注意什么？
|
|
樣品制備 ? 蛋白提�。焊鶕�(jù)樣本類(lèi)型選擇合適的裂解液，保證充分裂解細(xì)胞或組織，同時(shí)加入蛋白酶抑制劑，防止蛋白降解。 ? 蛋白定量：精確測(cè)定蛋白濃度，使上樣量一致，可采用BCA等方法。 凝膠電泳 ? 凝膠配制：根據(jù)目標(biāo)蛋白分子量選擇合適的凝膠濃度，確保凝膠均勻、無(wú)氣泡，聚合時(shí)間要足夠。 ? 上樣：上樣前將蛋白樣品與上樣緩沖液混合，加熱變性。上樣量要準(zhǔn)確，避免產(chǎn)生邊緣效應(yīng)。 ? 電泳條件：選擇合適的電壓和時(shí)間，通常先恒壓后恒流，注意電泳液的量和溫度，防止過(guò)熱導(dǎo)致蛋白條帶變形。 轉(zhuǎn)膜 ? 膜的選擇：根據(jù)蛋白分子量和實(shí)驗(yàn)需求選擇PVDF膜或硝酸纖維素膜，PVDF膜靈敏度高，硝酸纖維素膜結(jié)合力強(qiáng)。 ? 轉(zhuǎn)膜條件：根據(jù)膜的類(lèi)型和凝膠大小選擇合適的轉(zhuǎn)膜電流和時(shí)間，一般采用濕轉(zhuǎn)法，轉(zhuǎn)膜過(guò)程中保持低溫，防止蛋白擴(kuò)散。 ? 轉(zhuǎn)膜檢測(cè)：轉(zhuǎn)膜后可使用麗春紅染色檢測(cè)轉(zhuǎn)膜效果，確保蛋白成功轉(zhuǎn)移到膜上。 免疫反應(yīng) ? 封閉：轉(zhuǎn)膜后的膜用封閉液封閉，如5%的脫脂奶粉或BSA，防止非特異性結(jié)合。 ? 一抗孵育：選擇特異性高、親和力強(qiáng)的一抗，按照說(shuō)明書(shū)要求稀釋?zhuān)诤线m的溫度和時(shí)間下孵育，一般4℃過(guò)夜或室溫孵育1 - 2小時(shí)。 ? 二抗孵育：根據(jù)一抗的來(lái)源選擇相應(yīng)的二抗，二抗要與一抗匹配，孵育溫度和時(shí)間要適當(dāng)，一般室溫孵育1小時(shí)左右。 顯色與結(jié)果分析 ? 顯色方法：根據(jù)標(biāo)記的二抗選擇合適的顯色方法，如化學(xué)發(fā)光法、DAB顯色法等�；瘜W(xué)發(fā)光法靈敏度高，DAB顯色法結(jié)果易于保存。 ? 結(jié)果分析：使用成像系統(tǒng)采集圖像，分析蛋白條帶的位置、強(qiáng)度等信息，可使用相關(guān)軟件進(jìn)行灰度值分析，比較不同樣品中目標(biāo)蛋白的表達(dá)量。 此外，實(shí)驗(yàn)過(guò)程中要注意保持實(shí)驗(yàn)器材的清潔，避免交叉污染，同時(shí)做好實(shí)驗(yàn)記錄，包括試劑的配制、實(shí)驗(yàn)條件等，以便出現(xiàn)問(wèn)題時(shí)能夠及時(shí)排查。 發(fā)自小木蟲(chóng)IOS客戶端 |
回復(fù)此樓» 猜你喜歡
264求調(diào)劑
已經(jīng)有7人回復(fù)
-
085600 材料與化工 298
已經(jīng)有8人回復(fù)
-
266求調(diào)劑
已經(jīng)有5人回復(fù)
-
0854總分272
已經(jīng)有6人回復(fù)
-
EST拒稿重投
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
歡迎采礦、地質(zhì)、巖土、計(jì)算機(jī)、人工智能等專(zhuān)業(yè)的同學(xué)報(bào)考
已經(jīng)有11人回復(fù)
-
0703化學(xué)學(xué)碩 288分
已經(jīng)有4人回復(fù)
-
接收調(diào)劑
已經(jīng)有23人回復(fù)
-
化學(xué) 0703求調(diào)劑 總分293 一志愿211
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
304分材料專(zhuān)碩求調(diào)劑
已經(jīng)有5人回復(fù)
» 本主題相關(guān)商家推薦: (我也要在這里推廣)
相關(guān)版塊跳轉(zhuǎn)
我要訂閱樓主 生物前沿研究室 的主題更新
| 1 | 1/1 | 返回列表 |
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 264求調(diào)劑 +7 | 26調(diào)劑 2026-03-03 | 7/350 |
|
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 學(xué)碩材料275調(diào)劑 +4 | 路三三 2026-03-03 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 268求調(diào)劑 +10 | 簡(jiǎn)單點(diǎn)0 2026-03-02 | 14/700 |
|
|
|
[考研] 材料學(xué)碩318求調(diào)劑 +11 | February_Feb 2026-03-01 | 11/550 |
|
|
|
[考研] 267求調(diào)劑 +6 | 釣魚(yú)佬as 2026-03-02 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 化學(xué)0703求調(diào)劑 學(xué)碩 理/工科均可 總分279 +3 | 1一11 2026-03-03 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 材料工程求調(diào)劑 +3 | 1431251 2026-03-03 | 3/150 |
|
|
|
[考研]
材料325求調(diào)劑
 30+3
|
mariusuki 2026-03-02 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 282求調(diào)劑 +4 | 2103240126 2026-03-02 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 321求調(diào)劑一志愿東北林業(yè)大學(xué)材料與化工英二數(shù)二 +5 | 蟲(chóng)蟲(chóng)蟲(chóng)蟲(chóng)蟲(chóng)7 2026-03-01 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 0856求調(diào)劑285 +11 | 呂仔龍 2026-02-28 | 11/550 |
|
|
|
[考研] 306分材料調(diào)劑 +5 | chuanzhu川燭 2026-03-01 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 284求調(diào)劑 +10 | 天下熯 2026-02-28 | 11/550 |
|
|
|
[考研] 化工專(zhuān)碩342，一志愿大連理工大學(xué)，求調(diào)劑 +6 | kyf化工 2026-02-28 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 調(diào)劑 +3 | 13853210211 2026-03-02 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 材料類(lèi)求調(diào)劑 +11 | wana_kiko 2026-02-28 | 14/700 |
|
|
|
[考研] 291分工科求調(diào)劑 +9 | science餓餓 2026-03-01 | 10/500 |
|
|
|
[考研] 290求調(diào)劑 +9 | 材料專(zhuān)碩調(diào)劑； 2026-02-28 | 11/550 |
|
|
|
[基金申請(qǐng)]
剛錄用，沒(méi)有期刊號(hào)，但是在線可看的論文可以放為代表作嗎
10+3
|
arang1 2026-03-01 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 304求調(diào)劑 +3 | 52hz~~ 2026-02-28 | 5/250 |
|