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畢合生物2024銅蟲 (小有名氣)
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[交流]
🌟巨噬細胞純化：科研小白也能輕松上手
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做細胞實驗的時候，有沒有被巨噬細胞純化的問題困擾過？今天就來給大家嘮嘮巨噬細胞純化的兩種超實用方法，讓你輕松搞定！ 一、巨噬細胞純化是個啥？ 巨噬細胞也叫組織細胞，是由血液中的單核細胞分化而來的。它們在免疫系統(tǒng)里超重要，能吞噬病原體和細胞碎片，是身體的“清潔工”。純化巨噬細胞，就是要把它們從其他細胞里分離出來，方便后續(xù)研究。就像從一盤沙子里挑出金子，巨噬細胞就是那閃閃發(fā)光的金子！ 二、巨噬細胞純化的兩種方法：貼壁法和梯度離心法 貼壁法純化巨噬細胞 配制細胞懸液：用含20%-40%小牛血清的RPMI-1640培養(yǎng)液，把巨噬細胞配成2×10⁶～4×10⁶/ml的濃度。然后把細胞懸液接種到培養(yǎng)皿中，37℃、5% CO₂培養(yǎng)箱里培養(yǎng)1小時或24小時。1小時培養(yǎng)節(jié)省時間，但會丟失一些粘附力弱的細胞；24小時可以得到更多細胞。20%-40%的小牛血清能減少B淋巴細胞的粘附。 去除未粘附細胞：搖晃培養(yǎng)皿，懸浮未粘附的細胞，吸出細胞懸液。用預(yù)溫的Hanks液洗滌細胞3-4次。懸浮細胞可以重復(fù)粘附，得到更多巨噬細胞。 消化和洗滌細胞：用含2.5mmol/L EDTA的無鈣鎂Hanks液消化細胞，37℃處理15-30分鐘。用吸管吹打分離細胞，離心（250×g，10分鐘），去上清液。然后用預(yù)冷的Hanks液洗滌細胞3-4次，每次離心250×g，10分鐘，去上清液。最后用含10%小牛血清的RPMI-1640培養(yǎng)液懸浮細胞，臺盼藍染色計數(shù)細胞并決定細胞活力，將細胞配成所需的濃度。 梯度離心法純化巨噬細胞 制備密度梯度：取15ml離心管，將制備好的各濃度密度梯度材料按下濃上淡的順序依次分層加在離心管中，每個濃度2ml。最后加上巨噬細胞懸液3-5ml（約含2×10⁷～5×10⁷細胞）。 離心和洗滌細胞：4℃中，水平離心1000×g，30分鐘。垂直取出離心管，小心吸出各交界面的細胞。分別用預(yù)冷的含1%小牛血清RPMI-1640培養(yǎng)液洗滌各交界面細胞2次，每次200×g，10分鐘。最后用含10%小牛血清的RPMI-1640培養(yǎng)液將細胞配成所需的濃度。 三、總結(jié)：巨噬細胞純化，科研小白也能輕松搞定！ 巨噬細胞純化雖然聽起來有點復(fù)雜，但只要按照步驟來，就能輕松搞定！貼壁法適合快速得到一部分巨噬細胞，梯度離心法能得到更純的細胞。兩種方法各有優(yōu)勢，可以根據(jù)實驗需求選擇哦！ 畢合生物提供服務(wù)內(nèi)容：分子生物學(xué)、免疫, 重組蛋白及ELISA相關(guān)、活性小分子化合物、高端化學(xué)、材料化學(xué)、細胞資源庫與培養(yǎng)相關(guān)、生命科學(xué)、天然產(chǎn)物 |
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