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畢合生物2024銅蟲 (小有名氣)
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免疫熒光背景強(qiáng)？這幾個(gè)妙招輕松搞定！
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做免疫熒光實(shí)驗(yàn)的時(shí)候，是不是經(jīng)常遇到背景太強(qiáng)，目標(biāo)信號被淹沒的問題？今天就來給大家嘮嘮幾個(gè)超實(shí)用的小妙招，讓你的實(shí)驗(yàn)結(jié)果清晰又漂亮！ 一、背景強(qiáng)是個(gè)啥問題？ 免疫熒光背景強(qiáng)，就是除了目標(biāo)信號外，還有其他熒光的干擾，讓實(shí)驗(yàn)結(jié)果看起來“霧蒙蒙”的。這不僅影響染色結(jié)果的分析，還可能讓你錯(cuò)過重要的實(shí)驗(yàn)信息。所以，解決背景強(qiáng)的問題超重要！ 二、背景強(qiáng)的原因及解決方法 切片太厚組織切片太厚，熒光信號就會(huì)“疊羅漢”，背景自然就強(qiáng)了。解決方法很簡單，切片時(shí)盡量切薄一點(diǎn)，一般5-7微米厚就足夠啦！ 封閉不佳封閉液沒做好，切片就會(huì)出現(xiàn)非特異性染色，背景色就會(huì)增高�？梢試L試換一種封閉液，或者增加封閉時(shí)間，讓切片充分“封閉”起來。 二抗有特異性結(jié)合二抗和一抗不匹配，或者二抗本身有問題，也會(huì)導(dǎo)致背景強(qiáng)。解決方法就是更換一種二抗，試試別的品牌或型號。 自體熒光有些動(dòng)植物組織本身就有熒光，比如水母。如果實(shí)驗(yàn)前沒有做熒光猝滅，這些自體熒光就會(huì)干擾實(shí)驗(yàn)結(jié)果。所以，實(shí)驗(yàn)前一定要做好樣本的熒光猝滅處理。 抗體濃度太高抗體濃度過高，孵育時(shí)間太長，也會(huì)讓背景熒光增強(qiáng)�？梢試L試降低抗體濃度，或者減少孵育時(shí)間，讓信號更“純凈”。 三、總結(jié)：免疫熒光背景強(qiáng)，這幾個(gè)妙招輕松搞定！ 免疫熒光背景強(qiáng)雖然讓人頭疼，但只要找到原因，對癥下藥，就能輕松解決！切片切薄一點(diǎn)，封閉液做好，二抗選對，自體熒光處理好，抗體濃度控制好，實(shí)驗(yàn)結(jié)果就能清晰又漂亮！ 畢合生物提供服務(wù)內(nèi)容：分子生物學(xué)、免疫, 重組蛋白及ELISA相關(guān)、活性小分子化合物、高端化學(xué)、材料化學(xué)、細(xì)胞資源庫與培養(yǎng)相關(guān)、生命科學(xué)、天然產(chǎn)物 |
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