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生物前沿研究室新蟲 (小有名氣)
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分子生物學(xué)：PCR檢測(cè)技術(shù)操作步驟 已有1人參與
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聚合酶鏈反應(yīng)（polymerase chain reaction，PCR)是利用一段DNA為模板，在DNA聚合酶和核苷酸底物共同參與下，將該段DNA擴(kuò)增至足夠數(shù)量，以便進(jìn)行結(jié)構(gòu)和功能分析。PCR檢測(cè)方法在臨床上快速診斷細(xì)菌性傳染病等方面具有極為重要的意義。 PCR為最常用的分子生物學(xué)技術(shù)之一。至今在世界范圍內(nèi)都有廣泛的應(yīng)用，作為生物學(xué)實(shí)驗(yàn)的一個(gè)重要的方法，其有著不可估量的作用。 簡(jiǎn)單來說分為以下三個(gè)步驟： 1.DNA變性，加熱使靶DNA序列雙鏈解離成單鏈DNA。 2.引物與靶DNA退火，適當(dāng)降低溫度，使兩個(gè)引物分別結(jié)合成靶DNA兩條的3′末端向5′末端延伸。 3.引物延伸，在DNA聚合酶的催化下，引物沿著靶DNA3′末端向5′末端延伸。新合成的DNA鏈在變性解離后，又可作為模板與引物雜交，并且在DNA聚合酶的催化下，引導(dǎo)合成新的靶DNA鏈。如此反復(fù)進(jìn)行以上3個(gè)步驟，即可使靶DNA片段指數(shù)性擴(kuò)增。 具體操作步驟如下： 1.在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。? ? ? ? 10×PCR buffer? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? 5 μl? ? ?dNTP mix （2mM）? ? ? ? ? ? ? ? 4 μl? ? ?引物1（10pM）? ? ? ? ? ? ? ? ? ? 2 μl? ? ?引物2（10pM）? ? ? ? ? ? ? ? ? ? 2 μl? ? ?Taq酶 （2U/μl）? ? ? ? ? ? ? ? ? 1 μl? ? ?DNA模板（50ng-1μg/μl）? ?? 1 μl? ? ?加ddH2O至 50 μl? ?? 視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。 2.調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，最后在72℃ 保溫7min。? 3.結(jié)束反應(yīng)。PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長(zhǎng)期保存。 4.PCR的電泳檢測(cè)：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μl氯仿進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測(cè)。? 雖然，PCR技術(shù)已經(jīng)相當(dāng)成熟，但對(duì)于一個(gè)傳統(tǒng)實(shí)驗(yàn)室，不但要滿足高科技的實(shí)驗(yàn)設(shè)備，合理的空間布局等基本條件，一般還具有人員素質(zhì)專業(yè)性高、管理嚴(yán)謹(jǐn)度高、投入成本高、結(jié)果責(zé)任性高等特點(diǎn)。 發(fā)自小木蟲IOS客戶端 |
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新蟲 (初入文壇)
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- 專業(yè): 細(xì)胞生物學(xué)研究中的新方法
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小木蟲: 金幣+0.5, 給個(gè)紅包，謝謝回帖
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Atik Cameras是一家卓越的科研級(jí)相機(jī)和天文觀測(cè)相機(jī)制造商，產(chǎn)品適用于需要低噪聲，高靈敏度和高動(dòng)態(tài)范圍的高端應(yīng)用場(chǎng)景。 Atik Cameras TE系列科研制冷相機(jī)的成像技術(shù)采用新穎的新型腔室密封方法，同時(shí)增加制冷溫度，噪聲讀數(shù)非常低 ，可以檢測(cè)到最微弱的信號(hào)。 而TE-77作為TE系列最優(yōu)秀的產(chǎn)品，常用于 化學(xué)發(fā)光，熒光成像，光譜學(xué)，顯微鏡和生物發(fā)光，細(xì)胞成像，活體成像等科研中。 除了選擇前置或背面照明傳感器，TE-77還可以增加一個(gè)45mm雙穩(wěn)定高速科學(xué)快門，開啟時(shí)間為20.0毫秒。也可以調(diào)整案例或全面的軟件開發(fā)工具包，以適應(yīng)您的具體需求，所以請(qǐng)聯(lián)系您，討論您的需求。 在需要長(zhǎng)時(shí)間曝光和高靈敏度的科學(xué)成像領(lǐng)域（例如化學(xué)發(fā)光檢測(cè)、生物熒光成像、活體成像等生命科學(xué)領(lǐng)域及天文學(xué)觀測(cè)），相機(jī)的性能直接決定了實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可靠性與精度。Atik Cameras ChemiMOS憑借其零安培輝光（Zero Amp Glow）、超低噪聲設(shè)計(jì)以及像素滿阱容量，成為科學(xué)級(jí)成像系統(tǒng)的核心組件。 Atik ChemiMOS 在需要捕捉極為微弱信號(hào)的弱光成像條件下，滿足科學(xué)系統(tǒng)集成成像方面的要求。以耶拿分析公司的 UVP ChemSolo Auto 成像儀為例，該成像儀在面對(duì)需要長(zhǎng)時(shí)間曝光圖像的任務(wù)時(shí)，Atik ChemiMOS 的高靈敏度、長(zhǎng)時(shí)間曝光（支持?jǐn)?shù)小時(shí)連續(xù)曝光）、獨(dú)特的零安培輝光和低噪聲設(shè)計(jì)以及高量子效率，ChemiMOS能夠很好的應(yīng)用在UVP ChemSolo Auto 成像儀，為科研人員提供了可靠的數(shù)據(jù)支持。 目前北京領(lǐng)宇天際科技有限責(zé)任公司有Atik TE-77和Atik CHemiMOS試用機(jī)，歡迎各位老師咨詢?cè)囉谩? |
2樓2025-04-07 15:46:44
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