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畢合生物2024銅蟲 (小有名氣)
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細(xì)胞培養(yǎng)寶典
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細(xì)胞培養(yǎng)是不是讓你又愛又恨？愛它的神奇，恨它的“坑”多。 一、復(fù)蘇細(xì)胞：快融是關(guān)鍵！ 復(fù)蘇細(xì)胞的時候，一定要快！快！快！目的是防止小冰晶變成大冰晶，也就是防止冰晶的重結(jié)晶。凍存細(xì)胞從液氮中拿出來后，立即放入37℃水浴中，輕輕搖晃，1分鐘內(nèi)全部融化（千萬不要超過3分鐘哦）。融化后的細(xì)胞可以直接接種到含有完全培養(yǎng)液的培養(yǎng)瓶中，24小時后再換新鮮培養(yǎng)液，去除DMSO。 二、更換培養(yǎng)基：慎重行事！ 細(xì)胞培養(yǎng)過程中，如果細(xì)胞增殖和形態(tài)正常，最好不要更換培養(yǎng)基。細(xì)胞都有自己的“脾氣”，突然換培養(yǎng)基可能會讓它們不適應(yīng)，甚至死亡。但如果必須換，可以嘗試半換，讓細(xì)胞慢慢適應(yīng)新的培養(yǎng)基。如果是貼壁細(xì)胞，直接吸掉舊培養(yǎng)液，加入新的就行；如果是懸浮細(xì)胞，就需要低速離心，吸掉上清液，再加入新的培養(yǎng)液。 三、更換胎牛血清：品質(zhì)很重要！ 胎牛血清是細(xì)胞培養(yǎng)中的重要營養(yǎng)來源，所以它的品質(zhì)對細(xì)胞生長影響很大。如果細(xì)胞培養(yǎng)沒有異常，不建議隨意更換血清品牌。如果必須更換，最好先用一批細(xì)胞做預(yù)實驗，確保細(xì)胞能夠正常生長。 🌟四、收到細(xì)胞后：先觀察再操作！ 收到細(xì)胞后，先不要急著開蓋，放在培養(yǎng)箱靜置一會兒，然后在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞生長情況，并拍照記錄。如果細(xì)胞沒有異常，貼壁細(xì)胞未超過80%匯合度時，吸出部分培養(yǎng)液，留下10ml繼續(xù)培養(yǎng)；超過80%匯合度時，按細(xì)胞培養(yǎng)條件傳代培養(yǎng)。懸浮細(xì)胞則需要離心，吸掉上清液，用新鮮培養(yǎng)基懸浮細(xì)胞后移回培養(yǎng)瓶。 五、換液時機：看細(xì)胞密度！ 換液的時機主要看細(xì)胞生長密度，或者按照細(xì)胞株的基本數(shù)據(jù)上的更換時間來。一般來說，細(xì)胞生長到一定密度時，就需要更換新鮮培養(yǎng)基了。記得按時換液，保持細(xì)胞生長環(huán)境的穩(wěn)定哦！ 六、培養(yǎng)基加抗生素：謹(jǐn)慎使用！ 正常情況下，培養(yǎng)基中不應(yīng)添加抗生素，除非是特殊篩選系統(tǒng)。新手或者擔(dān)心污染的寶子們，可以適量添加抗生素，但要注意抗生素本身也有毒性，對細(xì)胞可能有傷害。所以，盡量在無菌環(huán)境下操作，減少污染風(fēng)險哦！ 七、避免污染：無菌操作是關(guān)鍵！ 細(xì)胞培養(yǎng)中最怕的就是污染。主要還是考慮無菌環(huán)境，做好操作臺的滅菌，別把培養(yǎng)基滴落在生物安全柜的入風(fēng)口，也別在培養(yǎng)箱里把培養(yǎng)基打翻。一旦出現(xiàn)污染，能救的就用抗生素救一下，但一般情況下，還是建議扔掉，避免交叉感染哦！ 畢合生物提供服務(wù)內(nèi)容：分子生物學(xué)、免疫, 重組蛋白及ELISA相關(guān)、活性小分子化合物、高端化學(xué)、材料化學(xué)、細(xì)胞資源庫與培養(yǎng)相關(guān)、生命科學(xué)、天然產(chǎn)物 |
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