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畢合生物2024銅蟲 (小有名氣)
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原代細(xì)胞和傳代細(xì)胞培養(yǎng)超全攻略
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被原代細(xì)胞培養(yǎng)和傳代細(xì)胞培養(yǎng)搞得頭大？今天就來給大家一次性搞清楚，讓你的細(xì)胞實(shí)驗(yàn)不再迷茫！ ? ? 一、原代細(xì)胞培養(yǎng)：從零開始的“細(xì)胞養(yǎng)成記” 原代細(xì)胞培養(yǎng)就像是從種子開始種一棵樹，要把動(dòng)物組織從機(jī)體里取出來，經(jīng)過各種處理，讓細(xì)胞在培養(yǎng)基里生存、生長(zhǎng)和繁殖。聽起來是不是有點(diǎn)復(fù)雜？別怕，跟著步驟來就行！ 準(zhǔn)備材料和儀器 儀器：培養(yǎng)箱（37℃）、培養(yǎng)瓶、吸管、離心機(jī)…… 材料：動(dòng)物組織塊 試劑：1640培養(yǎng)基（含20%小牛血清）、0.25%胰酶、Hank's液等。 處理組織 把組織塊放在燒杯里，用Hank's液洗2-3次，去掉血污。如果懷疑污染，就用青鏈霉素泡30-60分鐘。 剪切和消化 用眼科剪把組織切成2-3毫米的小塊，然后加入胰蛋白酶液，放到37℃的溫箱里消化。每隔20分鐘搖一搖，直到細(xì)胞分散成團(tuán)或單個(gè)細(xì)胞。? 分離和計(jì)數(shù) 用篩子過濾掉沒消化開的組織塊，離心后吸出上清，加入培養(yǎng)液。用計(jì)數(shù)板數(shù)一數(shù)細(xì)胞密度，調(diào)整好后分裝到培養(yǎng)瓶里。 培養(yǎng) 把培養(yǎng)瓶放到36.5℃的溫箱里，靜待細(xì)胞生長(zhǎng)。如果用CO?溫箱，記得用紗布或螺旋帽堵住瓶口。 二、傳代細(xì)胞培養(yǎng)：讓細(xì)胞“開枝散葉” 當(dāng)細(xì)胞在培養(yǎng)瓶里長(zhǎng)成致密單層后，就需要傳代培養(yǎng)了。這一步就像是給細(xì)胞“搬家”，讓它們有更多空間生長(zhǎng)。 吸除舊培養(yǎng)液 把培養(yǎng)瓶里的舊培養(yǎng)液吸掉，給細(xì)胞“換水”。 胰酶消化 加入少量胰蛋白酶和EDTA混合液，放到溫箱里2-5分鐘，直到細(xì)胞開始松動(dòng)。然后立即終止消化，吸掉消化液。 沖洗和吹打 用Hank's液沖洗掉殘余消化液，然后用吸管輕輕吹打瓶壁，讓細(xì)胞形成懸液。記得動(dòng)作要輕，別把細(xì)胞吹跑了！ 分裝和培養(yǎng) 用計(jì)數(shù)板數(shù)一數(shù)細(xì)胞密度，然后把細(xì)胞懸液分裝到新的培養(yǎng)瓶里，繼續(xù)放到溫箱里培養(yǎng)。 三、無菌操作：細(xì)胞實(shí)驗(yàn)的“生命線” 細(xì)胞實(shí)驗(yàn)最怕污染，所以無菌操作一定要做到位！ 洗手消毒 進(jìn)入超凈臺(tái)前，記得洗手，用75%酒精擦手和試劑瓶口。 火焰保護(hù) 點(diǎn)燃酒精燈，操作盡量在火焰附近進(jìn)行。耐熱物品要經(jīng)常燒灼消毒，但別燒太久哦！ 動(dòng)作輕快 操作要準(zhǔn)確敏捷，但別太快，防止空氣流動(dòng)帶來污染。動(dòng)作輕柔，別把細(xì)胞沖走。 布局合理 工作臺(tái)面上的用品要布局合理，別用手觸碰消毒過的器皿。物品擺放整齊，操作才會(huì)更順手！ 發(fā)自小木蟲手機(jī)客戶端 |
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