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zhiqiang2013新蟲 (初入文壇)
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[交流]
細胞培養(yǎng)遇到黑點怎么辦？這里有辦法！ 已有2人參與
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一旦您在細胞培養(yǎng)的過程中發(fā)現(xiàn)有黑點生成，首先肉眼觀察培養(yǎng)液是否變渾濁，如果變渾濁，基本可以確定是污染;如果肉眼觀察培養(yǎng)液沒有變渾濁：在顯微鏡下觀察黑點大小和形狀是否規(guī)則，是否運動，是做布朗運動還是呈直線型快速移動。如果黑點大小不規(guī)則，做布朗運動，黑點可能是細胞碎片(可能是細胞狀態(tài)不佳或者消化過度引起的)，也可能是血清反復凍融產(chǎn)生的蛋白沉淀引起的，也可能是細胞的代謝產(chǎn)物。如果黑點大小一致，快速移動，很可能是細菌污染。 如果細胞被污染，微生物則會大量繁殖，培養(yǎng)基就會迅速變黃、變混濁。污染包括細菌污染、支原體污染等。如果在鏡下觀察細胞，生長狀態(tài)良好，與黑點出現(xiàn)前相比，沒有任何變化。 那么，黑點的出現(xiàn)可能與以下幾種情況有關 1.細胞生長過老，破碎的細胞殘骸 2.血清質量不好，反復凍融的結果 3.配制培養(yǎng)基的pH值偏高，不宜細胞生長 4.配制培養(yǎng)基的水質、容器不合格 如何預防細胞培養(yǎng)中黑點的產(chǎn)生 掌握細胞傳代的最佳時機，不要細胞長老了再傳代;掌握好消化時間，防止消化過度產(chǎn)生細胞碎片;減少血清等試劑的凍融次數(shù);將培養(yǎng)液的PH調(diào)到最佳;嚴格控制水質和器皿的清潔。 黑點已經(jīng)產(chǎn)生了，如何進行處理 如果判定黑點是污染，請及時將細胞處理后丟棄。其他情況，可參照以下進行： 如果是懸浮細胞：收集細胞上清慢速離心（500-600rpm/min，5-6min）并更換新的培養(yǎng)瓶;如果是貼壁細胞：將細胞用PBS洗2-3遍，洗的時候，輕輕拍打培養(yǎng)瓶，讓貼壁不牢的碎片和顆粒脫落，再棄去PBS，消化時先加低濃度的胰酶如0.05%胰酶消化1min左右，讓細胞間隙中的顆粒和碎片脫落下來，去掉低濃度胰酶，然后正常消化細胞，將收集的細胞懸液慢速離心（500-600rpm/min，5-6min）并更換新的培養(yǎng)瓶，并可以嘗試適當增加血清濃度進行培養(yǎng)。 上述是上海酶聯(lián)為大家總結細胞培養(yǎng)驚現(xiàn)黑點，希望上述方法對細胞培養(yǎng)產(chǎn)生黑點同學有所幫助。如果您有不同的意見，歡迎交流！也祝您實驗越來越成功！ |
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Anson1358
鐵桿木蟲 (著名寫手)
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zhiqiang2013
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不一定，黑膠蟲只是細胞培養(yǎng)污染物的一種可能性，其他可能性還包括： 細胞碎片: 細胞凋亡或壞死后會產(chǎn)生細胞碎片，這些碎片在顯微鏡下可能呈現(xiàn)為黑色小點。 沉淀: 培養(yǎng)基中的某些成分，例如血清蛋白、鹽結晶等，可能會形成沉淀，在顯微鏡下也可能呈現(xiàn)為黑色顆粒。 細菌或真菌污染: 一些細菌或真菌污染也會在顯微鏡下呈現(xiàn)為黑色小點或顆粒狀物質。 但是，細菌和真菌通常會表現(xiàn)出明顯的增殖和擴散，并且培養(yǎng)基可能會變渾濁或產(chǎn)生異味。 其他污染物: 例如支原體、病毒等。 如何判斷是否是黑膠蟲？ 黑膠蟲的典型特征是在顯微鏡下呈現(xiàn)為布朗運動的黑色小點，大小不一，形態(tài)多樣，有時呈點狀，有時呈桿狀或絲狀。 它們通常會隨著培養(yǎng)時間的延長而增多，并且對細胞的生長有一定的影響。 |
4樓2025-02-11 17:07:25
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