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抗氧化酶酶液提取 取0.5 g鮮樣,加入2mL預(yù)冷的50 mM磷酸鉀緩沖液(pH 7.8),在預(yù)冷的研缽中磨成勻漿,加入3mL沖洗研缽兩次,致使最終體積為8mL; 于4?C下12,000 g離心15 min,上清液用于SODPODAPXCATGR酶活性和MDA含量的測定。 超氧化物歧化酶(SOD)(560nm) 【試劑】 NBT反應(yīng)液:250mL磷酸鉀緩沖液(50 mM,pH7.8)內(nèi)含: +0.4849g甲硫氨酸(13 mM,待完全溶解后再溶其他物質(zhì)) +0.01533gNBT(75 ?M) +0.0073gEDTA (0.1 mM ) +0.000188g核黃素(2 ?M,測定前加入并進行試驗) 【方法步驟】NBT法(氮藍四唑光氧化還原法) 1. 2.9mLNBT反應(yīng)液+100uL酶粗提液,兩管對照(光照/黑暗),用0.1mL雙蒸水替代酶提取液 2. 暗中對照管做空白調(diào)零,反應(yīng)混合液在4000 1x條件下反應(yīng)20 min以抑制NBT光化還原的50%為1個酶活性單位計算SOD活性。 3. 波長560nm處測定光對照管、測定管吸光值,根據(jù)以下公式測定SOD活性。 4. (A0-AS)*Vt*60 計算 A0*0.5*FW*Vs*t SOD活性(U.g-1FW.h-1)= 式中,A0:光下對照管吸光度;As:樣品測定管吸光度;Vt:樣品提取液總體積(mL);Vs:測定時取粗酶液量(mL); t: 顯色反應(yīng)光照時間(min);FW:樣品鮮重(g)。 @starseacow 發(fā)自小木蟲IOS客戶端 |
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