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| 【懸賞金幣】回答本帖問(wèn)題，作者fengyue518將贈(zèng)送您 50 個(gè)金幣 | ||
fengyue518銅蟲 (初入文壇)
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[求助]
各位大神，求助大腸桿菌發(fā)酵補(bǔ)料C/N比，誘導(dǎo)后什么時(shí)候開(kāi)始補(bǔ)料問(wèn)題 已有1人參與
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大腸桿菌（工程菌）發(fā)酵: 10L罐發(fā)酵，配料5L，OD600值10左右開(kāi)始IPTG誘導(dǎo)（4h左右），3h溶氧開(kāi)始反彈補(bǔ)糖，誘導(dǎo)后開(kāi)始補(bǔ)氮源（蛋白胨，酵母膏）；糖聯(lián)動(dòng)DO，氮源勻速補(bǔ)料，24h放罐。 問(wèn)題:1.濕菌體含量只有6%左右，多少算正常？ 2.氮源的補(bǔ)料時(shí)機(jī)？補(bǔ)料C/N？ 3.誘導(dǎo)時(shí)機(jī)是不是太早了？什么時(shí)候誘導(dǎo)合適？ 4.補(bǔ)糖聯(lián)動(dòng)DO還是PH更合適？ 麻煩各位大神，謝謝��！ @天使托 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
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2樓2024-09-23 10:27:17
后來(lái)就算
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3樓2024-09-24 08:10:48
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4樓2024-09-25 22:00:51
5樓2024-10-09 14:18:45
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3h開(kāi)始溶氧、ph就開(kāi)始上升，開(kāi)始補(bǔ)糖。補(bǔ)糖一停止ph，溶氧就開(kāi)始上升。最近做幾批OD值都是70多，現(xiàn)在比較迷惑的是補(bǔ)氮量和補(bǔ)氮時(shí)機(jī) 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
6樓2024-10-14 08:43:22
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DO和pH上升是因?yàn)榛A(chǔ)培養(yǎng)基里C源消耗完了，上升正常；補(bǔ)料停止pH和DO又繼續(xù)上升就表示補(bǔ)C沒(méi)有過(guò)量，也是正常的補(bǔ)料情況。聽(tīng)你的意思是C/N分開(kāi)補(bǔ)的，我是建議一起補(bǔ)，摸索出來(lái)一個(gè)C/N比例然后固定，畢竟補(bǔ)C不足或者過(guò)量都有直觀地表征，但是補(bǔ)N沒(méi)有。固定各時(shí)段的補(bǔ)料速度，通過(guò)轉(zhuǎn)速和通氣量控制DO是比較常規(guī)的操作。最后表達(dá)蛋白的菌株的話，如果是BL21起始你可以以發(fā)酵30+h OD600≥130下罐為參考，70左右一般是克隆菌株，表達(dá)菌株生長(zhǎng)能力會(huì)比克隆菌株強(qiáng)不少 |
7樓2024-10-15 08:37:43
Mr德古拉
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8樓2024-11-11 17:09:00
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