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huangyan.88.新蟲 (小有名氣)
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[交流]
western blot蛋白凝膠電泳
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| 在一個(gè)固定的點(diǎn)緩慢地加入膠，在膠凝固之前不要移動(dòng)位置。加交叉梳子不要有氣泡，然后加入蛋白樣品，蓋上蓋子檢查正負(fù)極，恒壓100v大約跑90分鐘，提前用1*Buffer浸泡NC膜，膠泡好后，小心的撬開玻璃板，把多余的膠切掉，三明治的順序是黑色一面-海綿-濾紙-膠-NC膜-濾紙-海綿-白色一面，插入清洗過的電泳槽，倒入1*Buffer，倒入百分之五脫脂奶粉封閉一小時(shí)，（一抗孵育），將膜放入自封袋中，加入抗體，4度過夜，室溫?fù)u床用1*TBST洗膜三次，（二抗孵育）百分之三的脫脂奶粉，將顯色劑均勻滴加于膜上，反應(yīng)五秒，放入暗盒中，蓋上暗盒曝光3-5秒，紅燈下觀察至條帶出現(xiàn)。 |
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