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神經(jīng)束路示蹤技術
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神經(jīng)束路示蹤，是一種利用軸漿運輸現(xiàn)象追蹤神經(jīng)元之間聯(lián)系的方法。如果示蹤劑能夠通過軸漿運輸跨過損傷區(qū)，說明有再生或從損傷區(qū)以外新生的軸突跨過損傷區(qū)。由于大部分神經(jīng)纖維束路缺乏特異的免疫標記，所以，神經(jīng)束路示蹤技術可以稱作研究軸突再生、判斷神經(jīng)元解剖結構是否完整和功能關系是否建立的標準。神經(jīng)束路示蹤技術可以分為四代，目前常用的為第二代逆行示蹤和第三代順行示蹤，二者軸漿流的方向不同。第二代利用逆行追蹤劑示蹤，注射到神經(jīng)纖維周圍被神經(jīng)末梢或軸突吸收后，逆軸漿流運輸?shù)缴窠?jīng)元胞體。第三代是利用順行追蹤劑示蹤，注射到神經(jīng)元胞體周圍，被神經(jīng)元胞體吸收后，順軸漿流主動運輸?shù)缴窠?jīng)末梢。其中一些示蹤劑還可以被熒光標記或本身可以發(fā)出熒光，便于用熒光顯微鏡直接觀察。 常用的示蹤劑有：HRP（horse radish peroxidase，辣根過氧化物酶），快藍（fast blue），熒光金（fluorogold），核黃（nuclear yellow），神經(jīng)生物素（neurobiotin），生物素化葡聚糖胺（biotinylated dextran amine,BDA）等，這里重點介紹CTB和BDA。 CTB是一種非常靈敏的示蹤劑，既可用于逆行示蹤，也可用于順行示蹤，還可以用于跨節(jié)示蹤。B亞單位為霍亂毒素與細胞受體結合的亞單位，無毒性。標記結果的可視化可以用抗 CBT 的抗體染色，通過免疫組織化學方法顯示出來；也可以用熒光素標記 CTB，在熒光顯微鏡下直接觀察。CTB常常與HRP交聯(lián)，形成CTB-HRP復合物，極大提高了作為示蹤劑的靈敏度。 |
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