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huangyan.88.新蟲(chóng) (小有名氣)
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染色 | 鈣鹽染色方法
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鈣在人體內(nèi)大量存在，存在形式分兩種，一種離子鈣，另一種結(jié)合鈣，它們?cè)谡５那闆r下滲透在所有組織和細(xì)胞中，構(gòu)成骨骼作為支持人體的支架，在分泌、運(yùn)送、肌肉收縮、神經(jīng)傳導(dǎo)等方面起著重要的作用。 許多染料可以與鈣形成螯合物，包括茜素紅S、紅紫素、核固紅等。鈣鹽染色常用的方法有兩種，分別是：硝酸銀法和茜素紅S法。其中硝酸銀法的原理是金屬置換，硝酸銀溶液作用于含有不溶性鈣鹽的切片時(shí)，鈣被銀所置換，銀鹽在光的作用下被還原為黑色金屬銀，適用于大量樣本的鈣鹽組織染色；茜素紅S屬一種蒽醌類(lèi)衍生物，是茜素磺酸鈉鹽，它能與碳酸鈣或磷酸鈣中的鈣鹽螯合形成橙紅色復(fù)合物，染色液采用茜素紅S和固綠，鈣鹽和固綠結(jié)合形成橙紅色沉淀，適用于少量鈣鹽組織的染色。 一、硝酸銀法 操作步驟： 1、切片脫蠟至水，蒸餾水洗； 2、浸入1%的硝酸銀液中于強(qiáng)陽(yáng)光下作用30-60min； 3、蒸餾水洗； 4、2%硫代硫酸鈉水溶液處理2min； 5、水洗； 6、淺染胞核5min左右； 7、水洗，分化并藍(lán)化； 8、伊紅染2-3min； 9、常規(guī)處理，脫水透明，中性樹(shù)膠封閉。 實(shí)驗(yàn)結(jié)果：鈣鹽呈黑色，胞核呈藍(lán)色，其余為粉紅色。 注意事項(xiàng)： 1、鈣鹽組織固定以中性福爾馬林為佳。 2、作用時(shí)間取決于陽(yáng)光照射時(shí)光的強(qiáng)度和時(shí)間。 二、茜素紅S法 操作步驟： 1、組織固定于10%中性福爾馬林或乙醇，常規(guī)脫水包埋；； 2、切片至95%乙醇； 3、載玻片豎立放置，徹底風(fēng)干； 4、切片入含茜素紅S染色液的玻片染缸，浸染1-5min； 5、蒸餾水快速?zèng)_洗； 6、入固綠染色液復(fù)染1min； 7、蒸餾水沖洗3次； 8、常規(guī)脫水透明，中性樹(shù)膠封閉。 實(shí)驗(yàn)結(jié)果：鈣沉積物呈橙紅色，背景呈綠色。 注意事項(xiàng)： 1、茜素紅S染色時(shí)間根據(jù)鈣鹽的含量來(lái)確定�？稍陲@微鏡下面觀察，見(jiàn)鈣鹽成較深的橙紅色即取出水洗，如染色液時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，就出現(xiàn)彌散現(xiàn)象，一般1-2min即可。 2、經(jīng)過(guò)茜素紅S染色液染色后，鈣沉積物是雙折射的。 上述染色方法可用于組織切片鈣鹽染色的同時(shí)，也可以用于細(xì)胞爬片的鈣鹽染色， MDL近期用硝酸銀法對(duì)誘導(dǎo)的大鼠成骨細(xì)胞進(jìn)行鈣鹽染色，步驟及結(jié)果如下： 1、細(xì)胞爬片固定（4%多聚甲醛）； 2、浸入1%的硝酸銀液中于強(qiáng)陽(yáng)光下作用30-60min； 3、蒸餾水洗； 4、2%硫代硫酸鈉水溶液處理2min； 5、蒸餾水洗； 6、淺染胞核5min左右； 7、蒸餾水洗，分化并藍(lán)化； 8、伊紅染2-3min； 9、常規(guī)處理，脫水透明，中性樹(shù)膠封閉。 |
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