 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 5 | 1/1 | 返回列表 |
| 查看: 2488 | 回復(fù): 9 | |||
| 當(dāng)前只顯示滿足指定條件的回帖，點(diǎn)擊這里查看本話題的所有回帖 | |||
[交流]
重組pPIC9K質(zhì)粒構(gòu)建及GS115酵母表達(dá)
|
|||
|
本人目前剛開(kāi)始做畢赤酵母表達(dá)，實(shí)驗(yàn)室沒(méi)有相關(guān)背景，很多地方不明白，希望各路大神指點(diǎn) 1、我已經(jīng)構(gòu)建好重組質(zhì)粒，但是現(xiàn)在有點(diǎn)不確定構(gòu)建是否有問(wèn)題：我的目的基因插入在5‘a(chǎn)ox1及a- factor后面，但是我把原本a- factor后面，taa之前，的30bp刪去了，不知有沒(méi)有影響 2、在線性化酶切時(shí)，酶切效率很低，50ul體系，其中dna 4ul（約4ug），酶1ul，37度酶切1h，用的是takara的快切酶，怎樣能提高酶切效率呢，是需要加大酶量還是延長(zhǎng)酶切時(shí)間？ 3、電轉(zhuǎn)之后轉(zhuǎn)化子特別少，電轉(zhuǎn)參數(shù)3kv，6ms，請(qǐng)問(wèn)怎么才能提高轉(zhuǎn)化率？ 4、實(shí)驗(yàn)室搖床只能達(dá)到200rpm，手冊(cè)上推薦220-250rpm，請(qǐng)問(wèn)轉(zhuǎn)速低會(huì)不會(huì)影響表達(dá)？ 5、搖瓶發(fā)酵階段需不需要控制ph？我是初始ph為5.0，用的是bmmy培養(yǎng)基 6、我用的載體ppic9k按理說(shuō)是分泌表達(dá)，但是我分析發(fā)酵上清，發(fā)現(xiàn)目的蛋白表達(dá)量特別低，之前用的是單拷貝菌株，會(huì)不會(huì)是因?yàn)檫@個(gè)呢？還是說(shuō)有可能沒(méi)有分泌出來(lái)，需要破胞分析一下？ 本人菜鳥階段問(wèn)題有點(diǎn)多，感謝各位賜教��！ 發(fā)自小木蟲IOS客戶端 |
回復(fù)此樓» 猜你喜歡
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)中的趣事：實(shí)驗(yàn)器材的 “烏龍”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)中的趣事：和實(shí)驗(yàn)材料的 “斗智斗勇”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
化學(xué)工程及工業(yè)化學(xué)論文潤(rùn)色/翻譯怎么收費(fèi)?
已經(jīng)有257人回復(fù)
-
蛋白質(zhì)檢測(cè)：精準(zhǔn)分析，解鎖生物分子的密碼
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之小鼠實(shí)驗(yàn)：嚴(yán)謹(jǐn)設(shè)計(jì)，解析生命機(jī)制的重要載體
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之重金屬檢測(cè)：精準(zhǔn)篩查，守護(hù)健康與環(huán)境的防線
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“蛙測(cè)重金屬我背鍋三千”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“鼠逃三次我發(fā)三篇SCI”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
納米粒度分析
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
林科院林化所招收材料與化工專業(yè)碩士，坐標(biāo)南京
已經(jīng)有0人回復(fù)
» 搶金幣啦！回帖就可以得到:
-
中科院蘭化所（蘇州基地）招聘助理研究員
+5/740
-
海南大學(xué)邱天宇老師團(tuán)隊(duì)招收博士生與招聘博士后
+5/105
-
冷凍行星球磨機(jī)、低溫高溫球磨機(jī)
+1/90
-
高校教師
+1/71
-
湖北省楚天學(xué)子教授團(tuán)隊(duì)招收專碩和學(xué)碩士6名
+5/55
-
長(zhǎng)江大學(xué)武漢校區(qū)新能源博士招聘-2026
+1/36
-
【沈陽(yáng)農(nóng)業(yè)大學(xué)機(jī)械專碩調(diào)劑】
+2/34
-
成都高校IMRC團(tuán)隊(duì)接收調(diào)劑研究生
+1/31
-
全獎(jiǎng)！|澳大/港理工與中科院先進(jìn)院招收2026FALL電氣、電力電子、暖通方向聯(lián)培博士！
+1/24
-
上海交通大學(xué)藥學(xué)院高楊課題組誠(chéng)聘博士后
+1/17
-
2026年浙江清華長(zhǎng)三角研究院智慧能源中心招聘博士后-電氣方向
+1/13
-
深圳大學(xué)機(jī)電與控制工程學(xué)院誠(chéng)招先進(jìn)制造、激光加工、增材制造、塑性成形等領(lǐng)域博士后
+1/12
-
一志愿清華材料與化工（0856）325 分，本科雙一流生物工程，誠(chéng)求調(diào)劑
+1/12
-
香港中文大學(xué)（深圳）管君課題組 微納光學(xué)方向 招收碩士、博士、博士后
+1/6
-
26考研一志愿西南交大，本科雙非通信工程，尋求西南地區(qū)的08調(diào)劑名額.
+1/5
-
天津大學(xué)浙江研究院（寧波）誠(chéng)聘高分子/化學(xué)/材料方向博士后、青年特聘研究員
+1/4
-
國(guó)家杰青低維材料與器件力學(xué)團(tuán)隊(duì)2026年招收博士研究生
+1/4
-
大灣區(qū)大學(xué)-哈爾濱工業(yè)大學(xué)（深圳）聯(lián)培博士招生
+1/3
-
河南大學(xué)張琳教授招收電化學(xué)方向博士研究生
+1/1
-
中南大學(xué)材料學(xué)院李明教授課題組誠(chéng)招2026年全日制學(xué)術(shù)型博士生
+1/1
★
小木蟲: 金幣+0.5, 給個(gè)紅包，謝謝回帖
小木蟲: 金幣+0.5, 給個(gè)紅包，謝謝回帖
| 有一些提高電轉(zhuǎn)效率的小建議，首先整個(gè)過(guò)程中用到的洗滌的山梨醇溶液和水溶液都是超純水，三角瓶，離心管和電擊杯最好也都用超純水潤(rùn)洗；其次線性化載體濃度一定要高，需要測(cè)一下DNA濃度，加入量在5μg左右，膠回收最后洗脫液用ddH2O；我的電擊條件是1500 V，5 ms，電擊后立刻加入1 ml預(yù)冷的1 mol/L山梨醇，混勻后轉(zhuǎn)入2 ml無(wú)菌的EP管中，28℃培養(yǎng)箱靜置1 h后加入1 ml無(wú)藥YPD培養(yǎng)基溫育2 h。 |
10樓2025-01-13 14:36:22
7樓2024-09-06 10:01:58
8樓2024-09-07 10:21:02
簡(jiǎn)單回復(fù)
hyjcs3樓
2024-09-05 21:28
回復(fù)
幸運(yùn)藍(lán)霉(金幣+2): 謝謝參與
嚄 發(fā)自小木蟲Android客戶端
2024-09-05 21:30
回復(fù)
XG-WUST5樓
2024-09-05 22:12
回復(fù)
幸運(yùn)藍(lán)霉(金幣+2): 謝謝參與
up 發(fā)自小木蟲IOS客戶端
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 0817化學(xué)工程319求調(diào)劑 +8 | lv945 2026-03-08 | 10/500 |
|
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 334求調(diào)劑 +3 | mjqzz 2026-03-06 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 311求調(diào)劑 +6 | zchqwer 2026-03-10 | 6/300 |
|
|
|
[碩博家園] 深圳大學(xué)碩士招生（2026秋，傳感器方向，僅錄取第一志愿） +4 | xujiaoszu 2026-03-11 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 材料專碩288分求調(diào)劑 一志愿211 +3 | 在家想你 2026-03-11 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 化工0817調(diào)劑 +8 | 燦若星晨 2026-03-10 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 306求調(diào)劑 +3 | 唐薏薏 2026-03-09 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 327求調(diào)劑 +3 | Ffff03 2026-03-10 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 0817學(xué)碩華東區(qū)求調(diào)劑 +3 | 30660438 2026-03-08 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 一志愿天津大學(xué)，英一數(shù)二305分求調(diào)劑，四六級(jí)已過(guò) +7 | 小小番的茄 2026-03-09 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 材料工程專碩調(diào)劑自薦信，初試323 +6 | 李白26 2026-03-07 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 337求調(diào)劑 +3 | 睡醒，。 2026-03-09 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 一志愿211 材料與化工 280求調(diào)劑 +3 | Sanity蔣 2026-03-08 | 3/150 |
|
|
|
[考博] 26申博自薦 +9 | 烷基八氮- 2026-03-06 | 11/550 |
|
|
|
[考研] 求調(diào)劑，一志愿華中科大0702，數(shù)一英一，293 +4 | 小羅露一二 2026-03-07 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 求調(diào)劑，不管什么專業(yè)，我是可塑造的人才一枚，希望遇到知己老師撈撈我 +4 | 13102137290 2026-03-06 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 306求調(diào)劑 +7 | Bahati 2026-03-05 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 275求調(diào)劑 +4 | 大爆炸難民 2026-03-06 | 5/250 |
|
|
|
[考博] 2026申博自薦 六級(jí)440電催化方向 +4 | 櫻落成影花成雙 2026-03-05 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 085602 293分求調(diào)劑 +3 | SivanNano. 2026-03-05 | 3/150 |
|