 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 5 | 1/1 | 返回列表 |
| 查看: 1950 | 回復(fù): 6 | ||
| 【懸賞金幣】回答本帖問(wèn)題，作者望風(fēng)止水將贈(zèng)送您 10 個(gè)金幣 | ||
| 當(dāng)前只顯示滿足指定條件的回帖，點(diǎn)擊這里查看本話題的所有回帖 | ||
望風(fēng)止水新蟲(chóng) (小有名氣)
|
[求助]
大腸桿菌原核表達(dá)，破碎后目的蛋白看不到了 已有1人參與
|
|
|
一直在做蛋白的原核表達(dá)與純化，目前遇到的一個(gè)問(wèn)題，不知道大家有何建議？ 我們?cè)贓.coli BL21(DE3)中做目的基因的克隆表達(dá)，過(guò)程是：OD值 0.8左右加入IPTG(終濃度0.5mM），25℃誘導(dǎo)24h后取2mL離心取沉淀，加100μL PBS和50μL 上樣液煮沸10min，取30μL跑SDS-PAGE。剩余的菌液離心后加入含8M尿素的binding buffer（因?yàn)閼岩赡康牡鞍自诎w里面），然后超聲破碎（200w，工作4S，間隔6S，工作20min）。破碎后13000rpm離心10min，上清保留做SDS-PAGE，沉淀用PBS洗3遍后加入binding buffer，取相同的兩管，1管加上樣液煮沸10min做SDS-PAGE，1管不煮沸直接做做SDS-PAGE，結(jié)果。直接菌液煮沸后看到了比較明顯的目的條帶（我同時(shí)做了2個(gè)目的蛋白，1個(gè)14 kDa左右，另1個(gè)35kDa左右），而后面幾個(gè)處理的目的條帶很弱，基本看不到，不知道怎么回事？ SDS-PAGE的圖片請(qǐng)查看鏈接: https://pan.baidu.com/s/1OAXXo0UxW8UfisBtNkL5tA?pwd=k861 提取碼: k861 |
回復(fù)此樓» 猜你喜歡
推薦一些20種氨基酸檢測(cè)的實(shí)際應(yīng)用案例
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)中的趣事：實(shí)驗(yàn)器材的 “烏龍”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
化學(xué)工程及工業(yè)化學(xué)論文潤(rùn)色/翻譯怎么收費(fèi)?
已經(jīng)有292人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)中的趣事：和實(shí)驗(yàn)材料的 “斗智斗勇”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
蛋白質(zhì)檢測(cè)：精準(zhǔn)分析，解鎖生物分子的密碼
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之小鼠實(shí)驗(yàn)：嚴(yán)謹(jǐn)設(shè)計(jì)，解析生命機(jī)制的重要載體
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之重金屬檢測(cè)：精準(zhǔn)篩查，守護(hù)健康與環(huán)境的防線
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“蛙測(cè)重金屬我背鍋三千”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“鼠逃三次我發(fā)三篇SCI”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
納米粒度分析
已經(jīng)有3人回復(fù)
liyan1994
鐵蟲(chóng) (初入文壇)
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 56
- 帖子: 11
- 在線: 9.5小時(shí)
- 蟲(chóng)號(hào): 24705604
- 注冊(cè): 2020-12-08
- 專業(yè): 生物化學(xué)
7樓2024-10-10 15:34:10
望風(fēng)止水
新蟲(chóng) (小有名氣)
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 86.7
- 帖子: 56
- 在線: 15.6小時(shí)
- 蟲(chóng)號(hào): 2081095
- 注冊(cè): 2012-10-23
- 專業(yè): 細(xì)胞增殖、生長(zhǎng)與分化
2樓2024-09-05 11:16:28
yandz680717
木蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)
- 應(yīng)助: 14 (小學(xué)生)
- 金幣: 4749.1
- 散金: 100
- 紅花: 3
- 帖子: 665
- 在線: 345.5小時(shí)
- 蟲(chóng)號(hào): 1160259
- 注冊(cè): 2010-12-01
- 性別: GG
- 專業(yè): 環(huán)境微生物學(xué)
|
先測(cè)序看看是不是有問(wèn)題，如果沒(méi)有問(wèn)題，考慮是不是稀有密碼子，可以轉(zhuǎn)入Rossetta 發(fā)自小木蟲(chóng)Android客戶端 |
3樓2024-09-05 15:11:08
望風(fēng)止水
新蟲(chóng) (小有名氣)
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 86.7
- 帖子: 56
- 在線: 15.6小時(shí)
- 蟲(chóng)號(hào): 2081095
- 注冊(cè): 2012-10-23
- 專業(yè): 細(xì)胞增殖、生長(zhǎng)與分化
4樓2024-09-05 19:39:18
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 302材料工程求調(diào)劑 +7 | Doleres 2026-03-01 | 8/400 |
|
|---|---|---|---|---|
|
|
[考研] 考研282分求調(diào)劑，接受跨專業(yè) +3 | 劉淄博 2026-03-04 | 5/250 |
|
|
[考研] 274環(huán)境工程求調(diào)劑 +4 | 扶柳盈江 2026-03-05 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 材料277分求調(diào)劑 +9 | 飯飯星球 2026-03-04 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 材料085601一志愿哈工大317 +3 | 壓迫感行 2026-03-04 | 3/150 |
|
|
|
[基金申請(qǐng)]
 本子寫(xiě)完了，給DS兄弟看了，得了92分
+5
|
Doma 2026-03-01 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 070300調(diào)劑一志愿南京大學(xué)化學(xué)專業(yè)，初試273分，有論文有專利有競(jìng)賽，求調(diào)劑B區(qū)211 +3 | 82206202 2026-02-28 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 0857求調(diào)劑 +4 | CDDD1013 2026-03-04 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 材料化工調(diào)劑 +15 | 今夏不夏 2026-03-01 | 18/900 |
|
|
|
[考研] 322,求調(diào)劑 +3 | 菜菜愛(ài)玩 2026-03-04 | 3/150 |
|
|
|
[論文投稿]
EST拒稿重投
 5+3
|
15102603076 2026-03-02 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 306求調(diào)劑 +7 | 張張張張oo 2026-03-03 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 290求調(diào)劑 +9 | ErMiao1020 2026-03-02 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 284求調(diào)劑 +6 | 天下熯 2026-03-02 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 化學(xué)0703求調(diào)劑 學(xué)碩 理/工科均可 總分279 +3 | 1一11 2026-03-03 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 26考研報(bào)考西工大材料308分求調(diào)劑 +4 | weizhong123 2026-03-01 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 化工335求調(diào)劑 +5 | 摸摸貓貓頭 2026-03-02 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 清華大學(xué) 材料與化工 353分求調(diào)劑 +5 | awaystay 2026-03-02 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 一志愿山東大學(xué)材料與化工325求調(diào)劑 +5 | 半截的詩(shī)0927 2026-03-02 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 264求調(diào)劑 +4 | 巴拉巴拉根556 2026-02-28 | 4/200 |
|