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醫(yī)用蠶絲科技新蟲(chóng) (初入文壇)
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[交流]
具有可控光療殺菌特性的多功能絲素/納米酶復(fù)合微針的構(gòu)建
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【研究背景】 牙周炎是一種高度流行的疾病,影響高達(dá)90%的世界人口。高度動(dòng)態(tài)的口腔環(huán)境、組織-牙齒“口袋”結(jié)構(gòu)和抗菌藥物耐藥性對(duì)牙周炎局部治療提出了挑戰(zhàn),迫切需要用先進(jìn)的生物材料和新的治療方法進(jìn)行升級(jí)。 上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院蔣欣泉專家團(tuán)隊(duì)提出了一種新的牙周炎治療策略,即納米酶催化的光/化學(xué)動(dòng)力學(xué)滅菌和微針原位給藥平臺(tái)的協(xié)同作用。通過(guò)在絲素蛋白(SF)生物分子上原位生長(zhǎng)單分散的超小CuS納米酶,然后與甲基丙烯酸化透明質(zhì)酸(HAMA)雜交,構(gòu)建了一種可生物降解的多功能光熱微針(MN-SF/CuS)貼片。構(gòu)建的SF/CuS微針可以方便地微創(chuàng)地深入牙周組織而不受唾液的影響,在那里它將熱作用,活性氧和銅傳遞到指定的深度,實(shí)現(xiàn)快速滅菌和抑制細(xì)菌生長(zhǎng)。同時(shí),SF/CuS微針實(shí)現(xiàn)了按需光療效果,而不損傷周?chē)=M織。臨床前大型動(dòng)物模型證實(shí),SF/CuS微針具有優(yōu)異的不可逆抗菌活性,并促進(jìn)組織再生,顯著提高牙周治療的耐受性和依從性。 【研究?jī)?nèi)容】 微針是一種新興的局部給藥系統(tǒng),可穿透皮膚、關(guān)節(jié)、血管等多種部位,已被廣泛研究。盡管近年來(lái)已取得了許多研究成果,但將其應(yīng)用于口腔疾病,尤其是牙周組織的研究尚不多見(jiàn)。微針可以以無(wú)痛、微創(chuàng)的方式穿透健康牙齦,可以在牙齦溝底部保持高濃度的藥物,而不會(huì)被唾液沖洗,極大地解決了牙周袋內(nèi)藥物流失的難題。 絲素蛋白(SF)是一種理想的生物生長(zhǎng)模板和穩(wěn)定劑,光刺激響應(yīng)型CuS納米粒子由于其固有的金屬離子生物功能和光熱響應(yīng)性而在生物納米藥物中得到了廣泛的研究。將SF/CuS納米酶安裝到微針系統(tǒng)中,其中光療將沿著微針內(nèi)部的孔結(jié)構(gòu)行進(jìn)并到達(dá)深層組織,從而優(yōu)化光熱效應(yīng)并保持納米酶的局部保留。 一、SF/CuS微針的構(gòu)建與表征 SF/CuS微針的構(gòu)建過(guò)程如圖1a和1b所示, XRD,XPS譜圖(圖1f)和FTIR譜圖(圖1g)表明成功合成了六方相CuS和SF/CuS。 我們進(jìn)一步研究了各種微針貼片的光熱性能,各種微針的光熱圖像顯示,每根針在各種照射強(qiáng)度下都具有優(yōu)異的光熱轉(zhuǎn)換特性而沒(méi)有任何變形(圖2),這有助于MN將光傳輸?shù)浇M織的更深層并在指定位置產(chǎn)生熱量。微針貼片的多孔結(jié)構(gòu)更有利于光捕獲和多重散射,這可以促進(jìn)其光吸收,因此導(dǎo)致更好的光熱轉(zhuǎn)換效率。 固體瓊脂實(shí)驗(yàn)表明具有良好的生物降解能力。NIR激光照射減緩了MN-SF/CuS和MN-CuS貼片的溶解(圖2j),微針的這一特性可以緩解納米酶在短時(shí)間內(nèi)的突釋,增加貼片的工作時(shí)間,從而減少無(wú)機(jī)顆粒的治療頻率和副作用。 二、抗菌和抗生物膜活性的評(píng)價(jià) 牙齦卟啉單胞菌(P.gingivalis)和具核梭桿菌(Fusobacterium nucleatum)(F.有核菌)是牙周炎的主要致病菌。將細(xì)菌與CuS或SF/CuS在NIR照射下共培養(yǎng),結(jié)果表明光熱效應(yīng)下的死亡細(xì)菌的增加,顯示活菌的比例最低。采用掃描電鏡和透射電鏡觀察了細(xì)菌的形態(tài)。結(jié)果表明,CuS和SF/CuS可破壞細(xì)胞膜,導(dǎo)致核酸和蛋白質(zhì)滲漏,最終導(dǎo)致細(xì)菌死亡。菌斑生物膜積累在牙周炎中非常常見(jiàn),CuS和SF/CuS各自能夠極大地抑制細(xì)菌生物膜形成。 三、通過(guò)調(diào)節(jié)ROS產(chǎn)物和溫度促進(jìn)抗菌 在近紅外輻射下,SF/CuS產(chǎn)生的高溫不僅破壞了細(xì)菌的膜結(jié)構(gòu),降低了細(xì)菌的活性,而且還促進(jìn)了ROS的產(chǎn)生。同時(shí),產(chǎn)生的活性氧可與受損的細(xì)菌細(xì)胞膜相互作用,造成細(xì)胞膜破裂,誘導(dǎo)蛋白質(zhì)滲漏,甚至進(jìn)入細(xì)菌內(nèi)部破壞DNA和細(xì)胞器,最終安全高效地殺死細(xì)菌。通過(guò)物理和化學(xué)手段相結(jié)合,可以在發(fā)揮良好治療效果的同時(shí),更好地避免細(xì)菌耐藥性的產(chǎn)生。 四、SF/CuS納米酶的生物相容性和細(xì)胞適應(yīng)性 牙齦成纖維細(xì)胞(gingivalfibroblast,GF)是牙齦組織中的主要細(xì)胞。采用CCK-8和鈣黃綠素-AM/碘化丙啶(Calcein-AM/PI)染色法評(píng)價(jià)CuS和SF/CuS與GF細(xì)胞的生物相容性。結(jié)果表明,SF具有優(yōu)異的生物相容性,而且使超小CuS納米酶均勻分布而不聚集。 為了研究SF/CuS的潛在生物學(xué)功能,我們進(jìn)行了全RNA測(cè)序,主成分分析(PCA)(圖6a)SF/CuS處理的潛在信號(hào)傳導(dǎo)途徑。結(jié)果顯示,p53在許多生物和病理過(guò)程中發(fā)揮作用,如免疫反應(yīng),代謝和抗氧化防御?傊,這些結(jié)果表明SF/CuS納米酶通過(guò)改善p53穩(wěn)定性、防止p53降解和限制巨噬細(xì)胞的鐵凋亡從而影響其免疫活性來(lái)抑制炎癥。 五、犬牙周炎模型的體內(nèi)療效 通過(guò)絲線結(jié)扎和細(xì)菌涂布法構(gòu)建了犬牙周炎模型,評(píng)價(jià)了各種微針貼劑的體內(nèi)抗菌和促進(jìn)組織再生能力。植入后8周,通過(guò)重建的三維(3D)和二維(2D)圖像評(píng)價(jià)所有實(shí)驗(yàn)組的牙槽骨增加水平(圖7 b)。MN-SF/CuS治療后,牙周組織的骨量和牙槽骨面積均明顯增加,說(shuō)明MN-SF/CuS治療后牙周炎得到明顯改善。表明MN-SF/CuS在近紅外照射下可以促進(jìn)牙槽骨修復(fù)并有效治療牙周炎。 通過(guò)VG染色,可以清楚地觀察牙齒與其周?chē)乐芙M織的接觸情況,并可以直接觀察牙齒周?chē)乐芄墙M織的高度和生長(zhǎng)情況。結(jié)果顯示,MN組骨組織深染紅色,骨組織薄,高度低。在頰側(cè)和舌側(cè),MN-SF/CuS組牙周骨組織的生長(zhǎng)和厚度均顯著高于MN和MN-CuS組(圖7d)。硬組織切片經(jīng)美藍(lán)染色后,MN-SF/CuS組的牙周骨組織在頰側(cè)和舌側(cè)均有明顯的小梁結(jié)構(gòu),小梁結(jié)構(gòu)粗大而堅(jiān)固,周?chē)猩钏{(lán)色的成骨細(xì)胞(圖7e)。MN-SF/CuS可顯著消除局部組織的細(xì)菌侵入,具有良好的抗菌效果,在治療組織感染方面具有良好的應(yīng)用前景。 【結(jié)論】 本研究成功構(gòu)建了一種新型光熱微針(MN-SF/CuS)貼片,用于基于有機(jī)-無(wú)機(jī)雜化SF/CuS納米酶性質(zhì)的深層牙周袋的抗菌治療和促進(jìn)組織再生。MN-SF/CuS可以將光靶向傳輸?shù)浇M織的更深層,以在NIR照射下實(shí)現(xiàn)局部高溫和可控的ROS產(chǎn)生。體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,SF/CuS具有良好的抗菌效果,MN-SF/CuS貼片通過(guò)光熱效應(yīng)、POD樣活性和銅釋放的協(xié)同作用,有效地消除了深部組織炎癥,促進(jìn)了組織再生。抗菌機(jī)理研究表明,光熱作用和產(chǎn)生的活性氧破壞細(xì)菌細(xì)胞膜,導(dǎo)致蛋白質(zhì)、核酸等物質(zhì)的滲漏,殺死細(xì)菌,抑制細(xì)菌生物膜的形成。 我們的光熱微針貼片為未來(lái)牙周炎和深部組織炎癥的治療提供了新的視角。 原文鏈接: https://doi.org/10.1016/j.nantod.2024.102297 |
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