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huangyan.88.新蟲 (小有名氣)
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[交流]
常見的核酸提取方法
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8種常見的核酸提取方法基因作為生物遺傳信息的載體,通過基因檢測(cè),大眾能夠發(fā)現(xiàn)身體內(nèi)潛在的疾病風(fēng)險(xiǎn),及早采取預(yù)防或干擾措施;蚴沁z傳的基本單元,是產(chǎn)生一條多肽鏈或功能RNA所必需的DNA片段。 而做好基因研究的第一步就是獲取核酸,核酸提取通常是開啟生物學(xué)研究的第一步,而且提取的核酸質(zhì)量高低也是決定下游實(shí)驗(yàn)成敗的關(guān)鍵因素之一。無(wú)論后續(xù)的克隆、PCR、QPCR、建庫(kù)測(cè)序等等都需要核酸才能順利進(jìn)行。核酸提取的基本原理 核酸分為脫氧核糖核酸(DNA)和核糖核酸(RNA)。DNA主要集中在細(xì)胞核內(nèi),線粒體和葉綠體中,而RNA主要分布在細(xì)胞質(zhì)當(dāng)中。 核酸作為基因表達(dá)的物質(zhì)基礎(chǔ),是分子生物學(xué)研究的主要對(duì)象。無(wú)論是進(jìn)行核酸的結(jié)構(gòu)還是功能研究,首先都需要對(duì)核酸進(jìn)行提取和純化。核酸提取為大量廣泛研究和應(yīng)用提供了基礎(chǔ)。 基本步驟 1、裂解細(xì)胞,釋放核酸。使用裂解液破壞樣品細(xì)胞結(jié)構(gòu),從而使樣品中的DNA游離在裂解體系中; 2、核酸的分離與純化。需要將與核酸結(jié)合的蛋白質(zhì)以及多糖、脂類等生物大分子和其他不需要的核酸分子去除; 3、核酸的濃縮、沉淀; 4、純化核酸。純化則是使DNA與裂解體系中的其它成分,如蛋白質(zhì)、鹽及其它雜質(zhì)徹底分離的過程。 核酸提取純化原則和要求 1、需要保證核酸一級(jí)結(jié)構(gòu)的完整性,為下游實(shí)驗(yàn)做準(zhǔn)備; 2、排除其它核酸分子的污染(提取DNA時(shí)排除RNA的干擾,反之亦然); 3、核酸樣品中沒有對(duì)酶有抑制作用的有機(jī)溶劑和高濃度的金屬離子; 4、將核酸樣品中其它生物大分子如蛋白質(zhì)、多糖和脂類分子的污染降到最低程度。 |
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