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huangyan.88.新蟲 (小有名氣)
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四氯化碳誘導(dǎo)肝性腦病動物模型
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肝性腦病是在急、慢性肝病基礎(chǔ)上發(fā)生的腦的神經(jīng)功能紊亂。世界消化病學(xué)會將肝性腦病分為3種類型：A型為與急性肝衰竭相關(guān)肝性腦病，不包括慢性肝病伴發(fā)的急性肝性腦��；B型為不伴內(nèi)在肝細(xì)胞疾病的門一體分流，肝組織學(xué)正常；C型為慢性肝病、肝硬化基礎(chǔ)上發(fā)生的肝性腦病，常常伴門靜脈高壓和（或）門一體分流。肝性腦病發(fā)病機制尚未完全闡明，也無有效的防治手段，且嚴(yán)重影響患者的生活質(zhì)量和生存期，是國內(nèi)外研究的熱點。肝性腦病動物模型的建立是其發(fā)病機制、診斷和治療研究中非常重要的一部分。 今天梳理一下其中的一種造模方法， 四氯化碳誘導(dǎo)肝性腦病動物模型 實驗動物 Wistar大鼠，3～4月齡，體重150～200g 實驗方法 制作肝性腦病模型：給予40% CCl4、橄欖油混合溶液腹部皮下注射，（CCl4∶橄欖油=1∶2.5），5%乙醇自來水溶液自飲。首次給藥每只鼠0.5mL/100g，以后每只0.3mL/100g，每周注射2次，共9周。一般情況下，此時造模成功。在造模過程中記錄動物體重、外觀指標(biāo)、死亡率和死亡數(shù)，同時觀察行為活動狀態(tài)，特別是神經(jīng)系統(tǒng)的功能狀態(tài)，死亡動物做完記錄后予以剔除。 步驟：實驗開始前所有動物均進(jìn)行Morris水迷宮測試，建立水迷宮逃避潛伏期之后按完全隨機的方法抽取大鼠作為正常對照組，剩余大鼠進(jìn)入造模組，造模組大鼠按復(fù)合因素造成肝硬化的方法進(jìn)行實驗，實驗第九周（肝硬化晚期）將造模組和對照組大鼠進(jìn)行水迷宮測試和腦電圖（EEG）測試，記錄逃避潛伏期，并觀察腦電圖（EEG）有無肝性腦病的典型高幅慢波。HE的納入標(biāo)準(zhǔn)：（1）模型組大鼠Morris水迷宮測試值大于對照組x+2.5s；（2）EEG測試有典型肝性腦病高幅慢波者；（3）出現(xiàn)典型HE行為、情緒者。HE模型建立。 Morris 水迷宮測試方法： 將水注入直徑130cm、高50cm的圓形不透明水箱中，水深25cm、水溫（26±1）℃。水中加適量奶粉使水保持不透明狀態(tài)。測試前1d將大鼠放入水箱中進(jìn)行適應(yīng)性訓(xùn)練。測試時，將大鼠面朝池壁置于水箱中以測量其發(fā)現(xiàn)水下1.5cm 處平臺（8cm × 8cm） 的能力。連續(xù)測試5d，每天訓(xùn)練兩組次，9：00和17：00時各一組次，每一組次訓(xùn)練8次。觀察指標(biāo)為發(fā)現(xiàn)并爬上平臺時間（逃避潛伏期），取每一組次的平均值進(jìn)行比較。如果大鼠在120s內(nèi)沒有發(fā)現(xiàn)平臺，則將大鼠置于平臺上，60s后拿離迷宮，其搜索平臺的時間記為120s。 腦電圖的測試方法：大鼠在1%戊巴比妥鈉（45mg/kg體重）腹腔麻醉下，俯臥固定，安置額枕骨間電極，鼻根部及雙耳分別接地線，用16導(dǎo)腦電圖機測定，并用電腦描記腦電圖，時間常數(shù)0.3，高頻濾波100Hz。固定、調(diào)試好儀器，安裝電極，單極導(dǎo)聯(lián)描記，于安靜狀態(tài)下進(jìn)行描記，記錄腦電圖，連續(xù)觀察10min，觀察振幅與頻率。振幅為波頂?shù)讲ǖ组g的垂直高度，代表腦部電位活動的大�。活l率為同一周期的腦電波在1s內(nèi)重復(fù)出現(xiàn)的次數(shù)。 血液生化檢測：全部大鼠在灌注前，水合氯醛麻醉后剪開胸腔，用一次性注射器無菌心臟穿刺采血5mL。其中取1mL置于無熱原肝素管中迅速用全自動血氨分析儀測血氨（BA）; 取2mL全血，分離血漿后以全自動生化分析儀測定丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶（ALT）、總膽紅素（TBil）、尿素氮（BUN）。 病理檢查：取大鼠肝臟同一葉肝組織，以4%中性甲醛溶液固定，常規(guī)脫水，石蠟包埋，HE染色后光鏡觀察。 檢測指標(biāo)：水迷宮逃避潛伏期；EEG；生化指標(biāo)；切片；動物活動情緒行為觀察。 |
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