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huangyan.88.新蟲 (小有名氣)
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裸鼠成瘤(CDX模型)之經(jīng)驗分享
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細(xì)胞株移植瘤模型(cell derived xenograft, CDX)，即將體外傳代培養(yǎng)的腫瘤細(xì)胞接種至免疫缺陷小鼠，也就是我們平時所說的裸鼠成瘤。裸鼠成瘤實驗,即在裸鼠皮下注入腫瘤細(xì)胞，觀察腫瘤的形成、發(fā)展及抗腫瘤藥物的效果。 動物一般選擇 4-6周齡Nude裸鼠,需要提前到SPF環(huán)境中適應(yīng)1周是時間 接種部位與接種細(xì)胞量 接種部位常為皮下,靜脈或原位;細(xì)胞量一般是5*106個/200ul,但是不同的細(xì)胞系的接種量略有差別。 成瘤的時間 皮下接種的細(xì)胞一般會在1-2周成瘤,一般不會超過1個月;尾靜脈和腹腔接種的細(xì)胞一般也是1周左右,需要密切觀察動物的體重與狀態(tài)進(jìn)行判斷。 為啥腫瘤不長? 如果細(xì)胞接種后超過預(yù)期的觀察時間仍未成瘤,需要從以下方面進(jìn)行排查原因: 一是細(xì)胞活力,細(xì)胞活力是影響腫瘤形成的重要原因,活力不夠不能成瘤,因此細(xì)胞消化下來PBS清洗后要盡快接種; 二是動物選擇,選擇的裸鼠周齡不宜過大,否則也會增大成瘤難度(如果還未成瘤建議更換缺陷程度更高的Nod-scid小鼠,NOG小鼠); 三是飼養(yǎng)環(huán)境,環(huán)境影響動物狀態(tài),狀態(tài)差的鼠容易發(fā)生死亡,不易成瘤。 為什么瘤子長起來又消失? 很可能開始我們觀察到的腫瘤是炎癥反應(yīng),到后來腫瘤細(xì)胞被小鼠自身吸收,需要繼續(xù)觀察腫瘤細(xì)胞吸收之后是否還能長出來,長不出來建議分析上述原因重新實驗。 需要觀察啥? 在腫瘤長出后，需要密切觀察動物的狀態(tài)，體重和瘤體積。瘤體積的測量一般采用公式V=ab2/2進(jìn)行計算。動物體重的增加活著減少量，直接反應(yīng)著動物的整體狀態(tài)，評估腫瘤是否出現(xiàn)轉(zhuǎn)移等。 怎么判斷腫瘤是否出現(xiàn)了轉(zhuǎn)移? 第一:病理剖檢。如果腫瘤出現(xiàn)了轉(zhuǎn)移,在肝臟或者腎臟等組織上肉眼可見明顯轉(zhuǎn)移灶。 第二:小動物活體成像。如果接種的腫瘤細(xì)胞帶有熒光標(biāo)簽或者熒光素酶,可以借助小動物活體成像儀進(jìn)行觀察瘤細(xì)胞的大小和轉(zhuǎn)移情況。 第三:小動物核磁。小動物核磁技術(shù)可以更明細(xì)那地觀察到腫瘤細(xì)胞在肝臟,肺臟或者其他器官的轉(zhuǎn)移情況 哪些細(xì)胞能夠成瘤? 目前經(jīng)驗證過的細(xì)胞有HCT116、HePG2、A549、MKN45、AGS、 CT26 、NCI-H460、HT-29、SK-OV-3、MCF-7、B16、SGC7901、BEL-7402、BGC-823、PC-12等(待更新)。 這么長都看完了，回個貼吧就  |
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