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2nd lab
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[交流]
農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化利福平常見問題分析
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大家熟知植物遺傳轉(zhuǎn)化種必不可少的步驟，農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化，今天就農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化常見問題解說一下，說的不好，大家諒解，僅供參考！? 農(nóng)桿菌的利福平抗性來源于農(nóng)桿菌的一個核基因突變，不在Ti質(zhì)粒上，所以利福平與Ti質(zhì)粒是否丟失沒有關(guān)系，利福平并不是農(nóng)桿菌培養(yǎng)過程中必須要添加的抗生素；相反，在農(nóng)桿菌培養(yǎng)基中加入利福平特別是加入利福平濃度過高會導(dǎo)致農(nóng)桿菌生長變慢，侵染活力降低，不建議在農(nóng)桿菌的培養(yǎng)基中加入利福平，在沒有超凈臺的實驗室加入利福平可以抑制雜菌生長，在超凈臺中進(jìn)行農(nóng)桿菌實驗可不添加利福平（1-4）。 ? ? ? 不同農(nóng)桿菌來源不同，有不同的核基因和Ti質(zhì)粒，表現(xiàn)出不同的生長勢，特別是在含有抗生素的培養(yǎng)基中生長時，表現(xiàn)出對抗生素不同的敏感度。EHA105對利福平更加敏感，生長更容易被利福平抑制，對利福平濃度的高敏感性也是EHA105菌株的一個鑒定標(biāo)準(zhǔn)。圖1顯示含有pCambia2301質(zhì)粒的EHA105、LBA4404在LK50，LK50+Rif20，LK50+Rif50三種培養(yǎng)基中的生長曲線——利福平對EHA105菌株影響較大，在液體培養(yǎng)基LK50中添加利福平不僅影響EHA105的生長速度，同時也影響EHA105的終濃度（在LK50中添加20ug/ml的利福平可以將EHA105的生長時間延遲7h，終濃度從OD600=6.42降到5.22，在LK50中添加50ug/ml的利福平可以將EHA105的生長時間延遲11h，終濃度從OD600=6.42降到4.13；而對照菌株LBA4404對液體培養(yǎng)基中利福平的濃度變化并不敏感，只是終濃度略有下降）。 此觀點僅供參考 發(fā)自小木蟲IOS客戶端 |
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