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8128jessica新蟲 (初入文壇)
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[交流]
L6細(xì)胞提蛋白問題
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想問問大家有做過L6細(xì)胞的WB嗎？這個(gè)細(xì)胞蛋白提出來濃度大概有多少？是很少嗎？我用的10CM皿，但是測(cè)完濃度居然才有2-2.5左右，用的碧云天的裂解液強(qiáng)（自己加了2種抑制劑）還有配套的BCA試劑盒，但是感覺測(cè)出來的濃度會(huì)虛高一點(diǎn)。跑膠之后內(nèi)參有，但是目標(biāo)蛋白沒有，我加了陽性藥組，條帶也很淺。換過CST的RIPA裂解液濃度也不高。想問問蛋白濃度低是什么原因？我加入裂解液后，冰箱放置20分鐘然后用刮刀刮下來，超聲大概30S吧（中間有間斷），之后離心取上清。 我的上樣量已經(jīng)是45UL了。但是目標(biāo)蛋白還是非常弱，有沒有什么辦法能讓蛋白濃度高一點(diǎn)？兩個(gè)10CM皿提一個(gè)樣本嗎？是這個(gè)細(xì)胞就這樣嗎？ 發(fā)自小木蟲IOS客戶端 |
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8128jessica
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2樓2024-08-02 11:17:01
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