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waiter

木蟲 (著名寫手)

蛋白純化系統(tǒng)(國產(chǎn)AKTA)銷售


【答案】應(yīng)助回帖

引用回帖:
10樓: Originally posted by wjny at 2024-08-11 21:02:48
感謝回答,我還想問兩個問題。
1. 單位od表達(dá)量應(yīng)該是相對菌體量來說的吧,單位應(yīng)該是g/g(生物量),這相比于濃度g/L為什么更合適呢?
2.在工業(yè)上對于培養(yǎng)基碳源氮源等成分的優(yōu)化中自然不需要太嚴(yán)格的要求,但是在 ...

單位OD表達(dá)量。和濕重表達(dá)量,單位體積表達(dá)量等等都一樣,都是需要將樣品重懸到一定體積,然后去檢測重懸后樣品中目標(biāo)蛋白濃度, 都可以換算出整個發(fā)酵體積的目標(biāo)表達(dá)總量。

但是,單位OD表達(dá)量,無論哪個發(fā)酵時期,樣品量都是恒定都OD值。排除了菌體增長過程菌體量增加對 表達(dá)產(chǎn)率都影響。比如發(fā)酵終點(diǎn)OD是100.  發(fā)酵過程OD為1、5、10、50、100的時候都取樣。 如果固定取100OD樣品,這幾個點(diǎn)取樣體積就是100ml,20ml、10ml、2ml和1ml,統(tǒng)一離心并重懸到5ml,就制備成濃度20OD的樣品。
如果以體積為單位,每個點(diǎn)取樣2ml,這五個點(diǎn)樣品OD就是2、10、20、100、200,統(tǒng)一離心并重懸到5ml,得到OD濃度就是0.4、2、4、20、40.這幾個樣品之間蛋白量差異并不是表達(dá)產(chǎn)率都差異,還包括菌量的差異早晨的產(chǎn)量差異。 不能真正反應(yīng)菌都表達(dá)效率。



第二個問題您考慮的是。但是單因素還是多因素是可以轉(zhuǎn)換的。但是單一原料無論成分是否復(fù)雜,是可以只當(dāng)一個因素考慮的。因?yàn)槟阋矡o法改變這原料都成分。如果您能改變里面的成分配比,您就可以當(dāng)多因素來做。
其實(shí)這些細(xì)節(jié)就是發(fā)酵的優(yōu)化點(diǎn),發(fā)酵優(yōu)化過程主要是摸索菌體生長和蛋白表達(dá)的平衡關(guān)系。 菌長快了表達(dá)率低,菌體少了表達(dá)量少,既要菌體長,又要表達(dá)率不低,菌體量也要穩(wěn)步增加。

前期生長過程比生長速率可以快點(diǎn),進(jìn)入表達(dá)階段,可以通過調(diào)節(jié)pH、DO、溫度和補(bǔ)料,降低比生長速率。讓菌穩(wěn)步生長,也穩(wěn)步表達(dá)。



上游我原核還是做過一些實(shí)驗(yàn)。下游蛋白純化做的更多一點(diǎn)。
你是學(xué)校還是企業(yè),下游純化也要做嗎?
11樓2024-08-13 22:10:31
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草木賁華

鐵蟲 (初入文壇)

引用回帖:
10樓: Originally posted by wjny at 2024-08-11 21:02:48
感謝回答,我還想問兩個問題。
1. 單位od表達(dá)量應(yīng)該是相對菌體量來說的吧,單位應(yīng)該是g/g(生物量),這相比于濃度g/L為什么更合適呢?
2.在工業(yè)上對于培養(yǎng)基碳源氮源等成分的優(yōu)化中自然不需要太嚴(yán)格的要求,但是在 ...

1. 用g/g是對應(yīng)產(chǎn)物提取純化階段的,因?yàn)楫a(chǎn)物普遍在胞內(nèi),需要把菌體裂解且不破壞產(chǎn)物。因此對于破碎菌體,提取產(chǎn)物的工業(yè)流程來書,單位菌體的產(chǎn)物量才決定了工作量(比如我想要100 g產(chǎn)物,需要裂解多少菌體)。而一般在生產(chǎn)階段,發(fā)酵的物料成本只有純化步驟的幾十分之一,因此對于整個生產(chǎn)來說,g/g高意味著純化成本更低,意味著生產(chǎn)成本更低;g/L可以通過多發(fā)酵幾次來解決。
2. 因?yàn)橛袡C(jī)N源本身也是C源,尤其是最常用的酵母粉和蛋白胨,甚至不同牌子和批次之間也有差異;同時大腸桿菌發(fā)酵過程很難舍棄有機(jī)N源,這就決定了很難去討論單因素。
12樓2024-10-09 14:40:03
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hebsmile

新蟲 (初入文壇)

【答案】應(yīng)助回帖

發(fā)酵調(diào)控是多因素作用的結(jié)果,一個因素變化,可能會引起其他方面的多個變化,所以調(diào)控要全面去考察定義,更多的時候是看趨勢,而不是單個變量。
13樓2024-11-12 15:35:51
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