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抗體選擇的10個(gè)步驟
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從蛋白質(zhì)免疫印跡到免疫熒光，再到FRET，抗體通常是實(shí)驗(yàn)成功和可重復(fù)實(shí)驗(yàn)的重要決定因素。但我們從未有過一個(gè)既定的“方案”來尋找最合適的抗體。本期小編為大家分享一個(gè)抗體選擇的10 步“方案”。 1.確定目的蛋白名稱 首先需要明確需要檢測的蛋白是什么，以選擇對應(yīng)的抗體。在這個(gè)過程中需要注意蛋白的中英文名字、別名等信息，可以通過GeneNames 找出目的蛋白的官方命名，再使用GeneCards識(shí)別別名以擴(kuò)大可能的搜索查詢范圍，因?yàn)榭贵w供應(yīng)商可能會(huì)使用不同的別名來命名相同的蛋白質(zhì)。 2.確定目的蛋白其他信息 確定目的蛋白的同分異構(gòu)體、功能域、加工形式、具有不同亞細(xì)胞定位（如細(xì)胞外與細(xì)胞內(nèi)等）的結(jié)構(gòu)域以及翻譯后修飾的預(yù)期特異性。 3.查找目的蛋白序列 使用 Uniprot找出目的蛋白質(zhì)（及其亞型）的氨基酸序列。 4. 確定與其他物種或蛋白質(zhì)的潛在交叉反應(yīng)性 使用NCBI的BLAST工具分析序列，確定目的蛋白中是否存在具有單個(gè)抗原特有的線性表位不同區(qū)域，以及靶抗原中的抗體是否可能與那些擁有相似序列的其他蛋白質(zhì)發(fā)生交叉反應(yīng)。 5. 表位選擇 根據(jù)研究目的，確定合適的表位。該表位可以是靶抗原中具有特異性的獨(dú)特區(qū)域，使得抗體能夠精確識(shí)別并與之結(jié)合；也可以是那些具有交叉反應(yīng)的區(qū)域，讓抗體能夠與其他相似序列的蛋白質(zhì)產(chǎn)生相互作用。 6.確定實(shí)驗(yàn)類型 抗體適用的實(shí)驗(yàn)類型往往跟抗原表位的類型有關(guān)。線性表位適合用在蛋白質(zhì)印跡（Western Blot）和石蠟包埋的免疫組化實(shí)驗(yàn)中，天然表位更適用于免疫沉淀（IP）、冷凍切片免疫組織學(xué)、流式細(xì)胞術(shù)和酶聯(lián)免疫（ELISA）這些實(shí)驗(yàn)。此外，那些能識(shí)別出福爾馬林耐藥表位并用于免疫組化檢測的抗體，同樣有可能在使用福爾馬林固定的其他技術(shù)（如免疫沉淀（ChIP））中展現(xiàn)出良好的效用。 7. 確定一抗同種型和宿主 在單次實(shí)驗(yàn)中，如果需要同時(shí)使用多種一抗進(jìn)行探測，選擇具有不同宿主或同種型的一抗會(huì)更為有利。這樣我們就可以利用帶有不同熒光標(biāo)記的同種型或宿主特異性二抗來同時(shí)檢測多個(gè)目標(biāo)。此方法在共定位或蛋白質(zhì)相互作用研究中尤為常見。 8. 抗體克隆性的選擇 抗體的克隆性的選擇，關(guān)鍵在于其預(yù)期的用途。多克隆抗體能夠識(shí)別抗原上的多個(gè)表位，檢測信號較強(qiáng)，但特異性相對較低，因此多克隆抗體采用Western Blot等技術(shù)，通過區(qū)分不同分子量處的非目標(biāo)結(jié)合帶，來進(jìn)行抗原的檢測。相比之下，單克隆抗體則具有更高的特異性，因?yàn)樗鼈冎会槍我坏谋砦缓屯N型，這使得它們在天然組織的研究中表現(xiàn)出色，如免疫沉淀IP和流式細(xì)胞術(shù)等應(yīng)用。 9. 文獻(xiàn)檢索 一旦確定了所需的抗原和抗體特征，下一步便是進(jìn)行深入的文獻(xiàn)檢索，尋找在相似實(shí)驗(yàn)環(huán)境（如相同組織類型或細(xì)胞系）中已公開發(fā)表的抗體信息。可以借助 BenchSci這樣的工具。在查閱文獻(xiàn)時(shí)，要仔細(xì)審查抗體的使用數(shù)據(jù)，特別是那些使用效果不一致的抗體。如果論文中沒有提供驗(yàn)證數(shù)據(jù)，可以聯(lián)系作者請求提供相關(guān)信息。 10. 確定候選抗體的優(yōu)先級并進(jìn)行驗(yàn)證 在文獻(xiàn)檢索后，列出市面上出售的抗體。根據(jù)產(chǎn)品數(shù)據(jù)表對抗體進(jìn)行優(yōu)先級排序，確保它們與在第1-8步中的抗原和抗體特性相匹配。在將抗體應(yīng)用于研究之前，務(wù)必進(jìn)行驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)（如敲除實(shí)驗(yàn)、免疫沉淀質(zhì)譜或CRISPR）。 畢合生物(www.bihebio.com)提供服務(wù)內(nèi)容：分子生物學(xué)、免疫, 重組蛋白及ELISA相關(guān)、活性小分子化合物、高端化學(xué)、材料化學(xué)、細(xì)胞資源庫與培養(yǎng)相關(guān)、生命科學(xué)、天然產(chǎn)物 |
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