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pcr電泳圖詳細(xì)分析
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聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）是一種用于放大擴(kuò)增特定的DNA片段的分子生物學(xué)技術(shù)，它可看作是生物體外的特殊DNA復(fù)制，PCR的最大特點(diǎn)是能將微量的DNA大幅增加。PCR技術(shù)的基本原理類似于DNA的天然復(fù)制過(guò)程，其特異性依賴于與靶序列兩端互補(bǔ)的寡核苷酸引物。 PCR反應(yīng)五要素：參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即：引物(PCR引物為DNA片段，細(xì)胞內(nèi)DNA復(fù)制的引物為一段RNA鏈）、酶、dNTP、模板和緩沖液（其中需要Mg2+）。 引物有多種設(shè)計(jì)方法，由PCR在實(shí)驗(yàn)中的目的決定，但基本原則相同。PCR所用的酶主要有兩種來(lái)源：Taq和Pfu，分別來(lái)自兩種不同的噬熱菌。其中Taq擴(kuò)增效率高但易發(fā)生錯(cuò)配。Pfu擴(kuò)增效率弱但有糾錯(cuò)功能。所以實(shí)際使用時(shí)根據(jù)需要必須做不同的選擇。 模板即擴(kuò)增用的DNA，可以是任何來(lái)源，但有兩個(gè)原則，第一純度必須較高，第二濃度不能太高以免抑制。 緩沖液的成分最為復(fù)雜，除水外一般包括四個(gè)有效成分：緩沖體系，一般使用HEPES或MOPS緩沖體系；一價(jià)陽(yáng)離子，一般采用鉀離子，但在特殊情況下也可使用銨根離子；二價(jià)陽(yáng)離子，即鎂離子，根據(jù)反應(yīng)體系確定，除特殊情況外不需調(diào)整；輔助成分，常見(jiàn)的有DMSO、甘油等，主要用來(lái)保持酶的活性和幫助DNA解除纏繞結(jié)構(gòu)。 DNA分子提取得到以后，需要通過(guò)電泳技術(shù)來(lái)檢測(cè)其數(shù)量和質(zhì)量，按相對(duì)分子質(zhì)量大小分離DNA的凝膠電泳技術(shù)，是一種分析鑒定DNA分子的重要實(shí)驗(yàn)手段。 當(dāng)一種分子被放置在電場(chǎng)當(dāng)中時(shí)，它們就會(huì)以一定的速度移向適當(dāng)?shù)碾姌O，這種電泳分子在電場(chǎng)作用下的遷移速度，叫做電泳的遷移率。它同電場(chǎng)的強(qiáng)度和電泳分子本身所攜帶的凈電荷數(shù)成正比。也就是說(shuō)，電場(chǎng)強(qiáng)度越大、電泳分子所攜帶的凈電荷數(shù)量越多，其遷移的速度也就越快，反之則較慢。 畢合生物（www.bihebio.com）提供服務(wù)內(nèi)容：分子生物學(xué)、免疫, 重組蛋白及ELISA相關(guān)、活性小分子化合物、高端化學(xué)、材料化學(xué)、細(xì)胞資源庫(kù)與培養(yǎng)相關(guān)、生命科學(xué)、天然產(chǎn)物 |
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