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小知識：pcr電泳條帶圖的解讀
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PCR擴(kuò)增后一般進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳分析，電泳后一般有以下幾種條帶： 1、引物帶。引物濃度過高或是擴(kuò)增效率不是特別高時都會有，一般不呈現(xiàn)為細(xì)帶，為發(fā)散狀；如果目的擴(kuò)增產(chǎn)物帶和引物帶都很亮，可以考慮適當(dāng)降低引物量。 2、引物二聚體帶。比引物跑得慢一點，條帶清晰，但如果擴(kuò)增產(chǎn)物小于100bp時，產(chǎn)物與引物二聚體就不好分別了，建議采用DNA聚丙烯酰胺電泳（不是蛋白質(zhì)的SDS聚丙烯酰胺電泳）；如果引物二聚體在優(yōu)化復(fù)性溫度后仍然嚴(yán)重影響目的產(chǎn)物的擴(kuò)增，優(yōu)先考慮更換引物設(shè)計（因為引物合成的成本比反復(fù)優(yōu)化條件的成本低） 3、目的擴(kuò)增產(chǎn)物帶。其大小與設(shè)計大小相同，條帶清晰。 4、非特異擴(kuò)增產(chǎn)物帶。其大小與設(shè)計大小不相同，條帶清晰。一般考慮通過提高復(fù)性溫度來減少或消除（也可用溫度梯度功能來尋找zui佳的復(fù)性溫度，東勝龍811型PCR儀就有此功能）。如果其片段大小比目的片段大較多，可以通過減少延伸時間來減少或消除（即不給它足夠的延伸時間）。還有一種非特異擴(kuò)增產(chǎn)物帶是來自于逆轉(zhuǎn)錄PCR實驗時的基因組DNA的污染，如果目的擴(kuò)增產(chǎn)物中有內(nèi)含子，擴(kuò)增產(chǎn)物很可能大于目的基因。這種條帶通過優(yōu)化復(fù)性溫度是不能消除的，可以在逆轉(zhuǎn)錄前用無RNA酶的DNA酶進(jìn)行樣本處理。 5、模板DNA帶。模板濃度過高時可能出現(xiàn)。如果是基因組DNA為模板，條帶可能會很亂且較大。一般進(jìn)行PCR擴(kuò)增時，模板濃度都不要太大，否則會產(chǎn)生一些比目的基因長一點的雜質(zhì)DNA（可能不成條帶，也看不到），這是由PCR擴(kuò)增原理造成的。 畢合生物（https://www.bihebio.com/）提供服務(wù)內(nèi)容：分子生物學(xué)、免疫, 重組蛋白及ELISA相關(guān)、活性小分子化合物、高端化學(xué)、材料化學(xué)、細(xì)胞資源庫與培養(yǎng)相關(guān)、生命科學(xué)、天然產(chǎn)物 |
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