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一文帶你了解4種常見(jiàn)的蛋白質(zhì)互作技術(shù)
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作為生命活動(dòng)的主要承擔(dān)者,蛋白質(zhì)的功能一直是科研活動(dòng)中備受關(guān)注的明星。蛋白質(zhì)通常不是“單打獨(dú)斗”的,絕大多數(shù)的功能蛋白質(zhì)會(huì)與其他蛋白質(zhì)相互作用,一起調(diào)控生命過(guò)程。那么,研究蛋白質(zhì)互作的技術(shù),你了解多少呢? 一、免疫共沉淀 免疫共沉淀(Co-Immunoprecipitation,COIP)技術(shù)是利用抗原抗體之間具有特異的免疫結(jié)合的原理,在細(xì)胞裂解液中加入特異性抗體,將抗原及與抗原結(jié)合的蛋白沉淀下來(lái)。免疫復(fù)合物可以通過(guò)Western Blot的方法驗(yàn)證抗原和其他蛋白之間的相互作用,也可以用質(zhì)譜的方法,檢測(cè)抗原的結(jié)合蛋白成員。 免疫共沉淀 COIP技術(shù)的優(yōu)缺點(diǎn): 優(yōu)點(diǎn): (1)得到的互作蛋白是細(xì)胞內(nèi)與誘餌蛋白天然互作的,符合體內(nèi)真實(shí)生理情況; (2)實(shí)驗(yàn)條件溫和,可避免人為的影響;(3)可分離得到天然狀態(tài)的相互作用蛋白復(fù)合物。 缺點(diǎn): (1)不適用于結(jié)合力弱或者瞬間結(jié)合的蛋白互作研究。 二、Pull Down Pull-down技術(shù)用固相化的、已標(biāo)記的餌蛋白或標(biāo)簽蛋白(生物素-、PolyHis-或GST-),從細(xì)胞裂解液中釣出與之相互作用的蛋白。通過(guò)Pull-down技術(shù)可以確定已知的蛋白與釣出蛋白或已純化的相關(guān)蛋白間的相互作用關(guān)系,從體外傳路或翻譯體系中檢測(cè)出蛋白相互作用關(guān)系。COIP檢測(cè)到的蛋白互作關(guān)系可能是第三個(gè)蛋白作為橋梁建立的,與之相比,pull down技術(shù)可用于檢測(cè)蛋白之間的直接互作關(guān)系。但pull down需要先把誘餌蛋白原核表達(dá)純化出來(lái),再與目的蛋白溶液孵育,其無(wú)法像COIP一樣模擬細(xì)胞內(nèi)天然的互作環(huán)境。 Pull-down技術(shù) 三、雙分子熒光互補(bǔ) 雙分子熒光互補(bǔ)技術(shù)是指熒光蛋白多肽鏈在某些不保守的氨基酸處切開(kāi),形成不發(fā)熒光的N-和C-末端2個(gè)多肽片段。將這2個(gè)熒光蛋白片段分別連接到1對(duì)能發(fā)生相互作用的目標(biāo)蛋白上,在細(xì)胞內(nèi)共表達(dá)或體外混合這2個(gè)融合蛋白時(shí),由于目標(biāo)蛋白質(zhì)的相互作用,熒光蛋白的2個(gè)片段在空間上互相靠近互補(bǔ),重新構(gòu)建成完整的具有活性的熒光蛋白分子,從而產(chǎn)生熒光�？梢暬� BiFC 技術(shù)最大的特點(diǎn)。 雙分子熒光互補(bǔ) 四、酵母雙雜交 酵母雙雜交系統(tǒng)是當(dāng)前廣泛用于蛋白質(zhì)相互作用組學(xué)研究的一種重要方法。其原理是當(dāng)靶蛋白和誘餌蛋白特異結(jié)合后,誘餌蛋白結(jié)合于報(bào)道基因的啟動(dòng)子,啟動(dòng)報(bào)道基因在酵母細(xì)胞內(nèi)的表達(dá),如果檢測(cè)到報(bào)道基因的表達(dá)產(chǎn)物,則說(shuō)明兩者之間有相互作用,反之則兩者之間沒(méi)有相互作用。在實(shí)際工作中,人們根據(jù)需要發(fā)展了單雜交系統(tǒng)、三雜交系統(tǒng)和反向雜交系統(tǒng)等。 蛋白質(zhì)互作 (2).jpg 除此之外,研究蛋白質(zhì)互作的方法還有噬茵體展示技術(shù)、等離子共振技術(shù)、抗體與蛋白質(zhì)陣列技術(shù)等。選擇合適的實(shí)驗(yàn)方案會(huì)讓您的實(shí)驗(yàn)過(guò)程事半功倍,MDL,專業(yè)的技術(shù)平臺(tái)為您的實(shí)驗(yàn)助力。 |
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nono20092樓
2024-05-21 17:13
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2024-05-21 18:40
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假大空4樓
2024-05-21 19:14
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庚辰辛丑5樓
2024-05-21 21:45
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tzynew6樓
2024-05-21 22:39
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