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【實(shí)驗(yàn)經(jīng)驗(yàn)】動物細(xì)胞培養(yǎng)中的問題與分析
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動物細(xì)胞培養(yǎng)是生物學(xué)基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)中的基礎(chǔ)，養(yǎng)不好細(xì)胞，后續(xù)的實(shí)驗(yàn)都難以開展。而細(xì)胞培養(yǎng)中也時常會有各種狀況發(fā)生，例如細(xì)胞生長緩慢、細(xì)胞不貼壁等，那么它們可能的原因都有什么呢？讓我們一起了解下吧！ 細(xì)胞生長緩慢 可能原因： 培養(yǎng)液及培養(yǎng)方法有誤；更換不同培養(yǎng)液或血清也可能導(dǎo)致生長緩慢。 培養(yǎng)液中一些細(xì)胞生長必須成分如生長因子耗盡或缺乏。 培養(yǎng)物中有少量細(xì)菌或真菌污染； 接種細(xì)胞起始濃度太低； 細(xì)胞老化； 支原體污染。 解決方法 檢查培養(yǎng)液和培養(yǎng)方法是否正確，比較新培養(yǎng)液與原培養(yǎng)液成分，讓細(xì)胞逐漸適應(yīng)新培養(yǎng)液； 換入新鮮配置培養(yǎng)液，或補(bǔ)加生長因子； 用無抗生素培養(yǎng)液培養(yǎng)，如發(fā)現(xiàn)污染，丟棄培養(yǎng)物； 增加接種細(xì)胞起始濃度； 換用新的保種細(xì)胞； 分離培養(yǎng)物，檢測支原體，如發(fā)現(xiàn)支原體污染，丟棄培養(yǎng)物。 細(xì)胞不貼壁生長 可能原因： 支原體污染。 培養(yǎng)瓶瓶底不干bai凈。 培養(yǎng)液pH 值過堿（NaHCO3 分解）。 消化du液或培養(yǎng)液配制錯誤、過期儲存、儲存不當(dāng)。 細(xì)胞老化（如傳代前細(xì)胞已匯合導(dǎo)致失去貼附性）。 接種細(xì)胞起始濃度太低或太高。 解決方法： 縮短胰蛋白酶消化時間或降低胰蛋白酶濃度. 分離培養(yǎng)物,檢測支原體.清潔支架和培養(yǎng)箱.如發(fā)現(xiàn)支原體污染,丟棄培養(yǎng)物. 注意刷洗,或換用一次性塑料培養(yǎng)瓶. 使用無菌醋酸溶液調(diào)整pH 值或充入無菌CO2（將培養(yǎng)液敞口放入培養(yǎng)箱也可）. 重新配置消化液或培養(yǎng)液. 啟用新的保種細(xì)胞. 調(diào)節(jié)最佳接種細(xì)胞濃度. 培養(yǎng)細(xì)胞死亡 可能原因： 培養(yǎng)箱內(nèi)無CO2； 培養(yǎng)箱內(nèi)溫度波動太大； 細(xì)胞凍存或復(fù)蘇過程中損傷； 培養(yǎng)液滲透壓不正確； 培養(yǎng)液中有毒代謝產(chǎn)物堆積。 解決方法： 檢測培養(yǎng)箱內(nèi)CO2； 檢查培養(yǎng)箱內(nèi)溫度； 取新的保存細(xì)胞種； 檢測培養(yǎng)液滲透壓； 換入新鮮培養(yǎng)液。 |
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