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科研戰(zhàn)神·王鐵蟲 (小有名氣)
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[交流]
石蠟切片HE染色實(shí)驗(yàn)步驟
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1.組織包埋 (1)乙醇脫水:組織經(jīng)不同濃度的乙醇溶液進(jìn)行逐級(jí)脫水 70% 80% 90% 95% 100% 100%,各級(jí)乙醇 40min(注意:骨性及鈣化組織需在JYBL-Ⅱ脫鈣液中浸泡24h,待組織軟化后再進(jìn)行乙醇脫水步驟); (2)透明:組織依次浸泡于三個(gè)二甲苯中,每缸各1h; (3)浸蠟:組織依次浸泡于三個(gè)石蠟缸中,每缸各1h; (4)包埋:將液態(tài)的石蠟倒入模具盒中,再將浸好蠟的組織塊平放底部,注意切面方向朝下放置,待石蠟?zāi)毯笕サ舭窨,完全冷卻變硬后再修整蠟塊,組織外圍的石蠟保留適中以便切片。 圖片 2.切片制作 將預(yù)冷的蠟塊固定在石蠟切片機(jī)上,使蠟塊的切面與刀口成平行方向,刀的傾斜度通常15℃,轉(zhuǎn)動(dòng)輪轉(zhuǎn)推進(jìn)器,調(diào)節(jié)切片厚度為 4μm,切成厚度均勻的切片。左手持毛筆,右手旋動(dòng)切片機(jī)轉(zhuǎn)把,切片帶出來(lái)之后,用毛筆輕輕托起,再用鑷子輕鑷蠟片,以正面放入展片箱中,其水溫 45℃左右。待攤平整后撈片。貼附切片左手持載玻片之一端,垂直入水去附貼切片,右手用鑷子輔助推動(dòng),附貼至玻片上的三分之二處。切片貼附后,放在空氣中稍晾干,放置 65℃烤片機(jī)上烤1h,再放置烘箱內(nèi)烘烤2h。 圖片 3.石蠟切片脫蠟至水 依次將石蠟切片放入二甲苯Ⅰ10min-二甲苯Ⅱ10min-二甲苯Ⅲ10min-無(wú)水乙醇Ⅰ5min-無(wú)水乙醇Ⅱ5min-90%酒精5min-80%酒精5min-70%酒精5min-50%酒精5min梯度脫蠟。 圖片 4.HE染色 石蠟切片入蘇木素染0.5-1分鐘min,自來(lái)水漂洗,1%鹽酸酒精分化數(shù)秒,自來(lái)水漂洗,然后1%氨水水溶液返藍(lán)1min,流水沖洗數(shù)秒,放入伊紅染液中染色數(shù)秒,流水漂洗。 圖片 5.脫水封片 石蠟切片依次放入75%乙醇 2min -85%乙醇 2min-無(wú)水乙醇5min -無(wú)水乙醇5min -二甲苯5min 透明,將切片從二甲苯拿出來(lái)中性樹膠封片。 圖片 6.結(jié)果判讀 細(xì)胞核為藍(lán)色,細(xì)胞質(zhì)為紅色 圖片 |
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