 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 2 | 1/1 | 返回列表 |
| 查看: 827 | 回復(fù): 1 | |||
[交流]
PCR擴(kuò)增的步驟 已有1人參與
|
|
PCR由變性--退火--延伸三個(gè)基本反應(yīng)步驟構(gòu)成： 模板DNA的變性 模板DNA經(jīng)加 熱至93℃左右一定時(shí)間后，使模板DNA雙鏈或經(jīng)PCR擴(kuò)增形成的雙鏈DNA解離，使之成為單鏈，以便它與引物結(jié)合，為下輪反應(yīng)作準(zhǔn)備；模板DNA與引 物的退火(復(fù)性)模板DNA經(jīng)加熱變性成單鏈后，溫度降至55℃左右，引物與模板DNA單鏈的互補(bǔ)序列配對(duì)結(jié)合； 引物的延伸 DNA模板--引物結(jié)合 物在TaqDNA聚合酶的作用下，以dNTP為反應(yīng)原料，靶序列為模板，按堿基配對(duì)與半保留復(fù)制原理，合成一條新的與模板DNA 鏈互補(bǔ)的半保留復(fù)制鏈，重復(fù)循環(huán)變性--退火--延伸三過(guò)程，就可獲得更多的“半保留復(fù)制鏈”，而且這種新鏈又可成為下次循環(huán)的模板。每完成一個(gè)循環(huán)需 2～4分鐘，2～3小時(shí)就能將待擴(kuò)目的基因擴(kuò)增放大幾百萬(wàn)倍。到達(dá)平臺(tái)期(Plateau)所需循環(huán)次數(shù)取決于樣品中模板的拷貝。PCR的反應(yīng)動(dòng)力學(xué) PCR的三個(gè)反應(yīng)步驟反復(fù)進(jìn)行，使DNA擴(kuò)增量呈指數(shù)上升。反應(yīng)最終的DNA 擴(kuò)增量可用Y=(1+X)n計(jì)算。Y代表DNA片段擴(kuò)增后的拷貝數(shù)，X表示平(Y)均每次的擴(kuò)增效率，n代表循環(huán)次數(shù)。平均擴(kuò)增效率的理論值為100%， 但在實(shí)際反應(yīng)中平均效率達(dá)不到理論值。反應(yīng)初期，靶序列DNA片段的增加呈指數(shù)形式，隨著PCR產(chǎn)物的逐漸積累，被擴(kuò)增的DNA片段不再呈指數(shù)增加，而進(jìn) 入線性增長(zhǎng)期或靜止期，即出現(xiàn)“停滯效應(yīng)”，這種效應(yīng)稱平臺(tái)期數(shù)、PCR擴(kuò)增效率及DNA聚合酶PCR的種類和活性及非特異性產(chǎn)物的競(jìng)爭(zhēng)等因素。大多數(shù)情況下，平臺(tái)期的到來(lái)是不可避免的。 畢合生物（www.bihebio.com)提供服務(wù)內(nèi)容：分子生物學(xué)、免疫, 重組蛋白及ELISA相關(guān)、活性小分子化合物、高端化學(xué)、材料化學(xué)、細(xì)胞資源庫(kù)與培養(yǎng)相關(guān)、生命科學(xué)、天然產(chǎn)物 |
回復(fù)此樓» 猜你喜歡
材料與化工求調(diào)劑
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
298求調(diào)劑
已經(jīng)有7人回復(fù)
-
288求調(diào)劑
已經(jīng)有4人回復(fù)
-
0856材料與化工290求調(diào)劑
已經(jīng)有4人回復(fù)
-
286求調(diào)劑
已經(jīng)有13人回復(fù)
-
085700資環(huán)求調(diào)劑，初始279，六級(jí)已過(guò)，英語(yǔ)能力強(qiáng)
已經(jīng)有5人回復(fù)
-
22408 275分求調(diào)劑
已經(jīng)有4人回復(fù)
-
324求調(diào)劑
已經(jīng)有10人回復(fù)
-
303求調(diào)劑
已經(jīng)有10人回復(fù)
-
接受26屆調(diào)劑生
已經(jīng)有18人回復(fù)
» 本主題相關(guān)商家推薦: (我也要在這里推廣)
喜歡和一氧化二?/a>
新蟲(chóng) (小有名氣)
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 337.9
- 散金: 30
- 沙發(fā): 5
- 帖子: 209
- 在線: 18.3小時(shí)
- 蟲(chóng)號(hào): 35427242
- 注冊(cè): 2024-05-14
- 專業(yè): 有機(jī)合成
2樓2024-06-10 01:15:51
相關(guān)版塊跳轉(zhuǎn)
我要訂閱樓主 Sh畢合生物 的主題更新
| 2 | 1/1 | 返回列表 |
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 0856材料與化工290求調(diào)劑 +3 | Nebulala 2026-03-08 | 4/200 |
|
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 085700資環(huán)求調(diào)劑，初始279，六級(jí)已過(guò)，英語(yǔ)能力強(qiáng) +4 | 085700資環(huán)調(diào)劑 2026-03-03 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 303求調(diào)劑 +8 | forgman95 2026-03-05 | 10/500 |
|
|
|
[考研] 334求調(diào)劑 +7 | Trying] 2026-03-06 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 334求調(diào)劑 +3 | Trying] 2026-03-07 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 2026考研求調(diào)劑-材料類-本科211一志愿985-初試301分 +4 | 蟲(chóng)友233 2026-03-07 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 085600材料與化工，一志愿廣州985，求調(diào)劑 +12 | qqyyaill 2026-03-05 | 12/600 |
|
|
|
[考研] 材料調(diào)劑 +10 | ounce. 2026-03-04 | 12/600 |
|
|
|
[考研] 266材料化工求調(diào)劑 +5 | 哇塞王帥 2026-03-03 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 287求調(diào)劑 +3 | 看看我. 2026-03-05 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 304求調(diào)劑 +3 | 曼殊2266 2026-03-04 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 一志愿天津大學(xué)085600 319分 材料與化工 金屬方向 求調(diào)劑 +6 | 青科11 2026-03-02 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 085701環(huán)境工程 求調(diào)劑 +7 | xiiiia 2026-03-04 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 0855機(jī)械工程324求調(diào)劑 +3 | 鄭SK 2026-03-02 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 0703化學(xué)求調(diào)劑 +3 | 將未有期 2026-03-04 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 281求調(diào)劑 +3 | 我是小小蔥蔥 2026-03-03 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 293求調(diào)劑 +4 | 是樂(lè)渝哇 2026-03-03 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 一志愿中科大能動(dòng)297求調(diào)劑，本科川大 +3 | 邵11 2026-03-03 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 26考研報(bào)考西工大材料308分求調(diào)劑 +4 | weizhong123 2026-03-01 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 求調(diào)劑 +11 | yunziaaaaa 2026-03-01 | 13/650 |
|