版塊導航: 正在加載中...

登錄注冊

應《網絡安全法》要求，自2017年10月1日起，未進行實名認證將不得使用互聯網跟帖服務。為保障您的帳號能夠正常使用，請盡快對帳號進行手機號驗證，感謝您的理解與支持！

24小時熱門版塊排行榜

>論壇更新日志 (5359)
>考研 (1218)
>導師招生 (875)
>文獻求助 (237)
>休閑灌水 (193)
>考博 (141)
>基金申請 (115)
>蟲友互識 (103)
>論文投稿 (95)
>碩博家園 (81)
>教師之家 (63)
>找工作 (60)
>招聘信息布告欄 (54)
>博后之家 (48)
>公派出國 (39)
>論文道賀祈福 (22)

返回列表

科研戰(zhàn)神·王

鐵蟲 (小有名氣)

應助: 1 (幼兒園)
金幣: 83.9
散金: 63
帖子: 189
在線: 72.2小時
蟲號: 34416978
注冊: 2024-01-11
專業(yè): 臨床藥理

[交流] 干貨分享 | 你的生物實驗室的緩沖液，是這些嗎？

實驗室中常常使用的各類溶液種類繁多，且配制方法五花八門，是否挑花眼了呢?本文總結了近三十種常用溶液、緩沖液、培養(yǎng)基的配制方法，涵蓋了分子生物學、蛋白分析、細胞培養(yǎng)、微生物培養(yǎng)等各個領域。

核酸電泳之 TBE、TAE 和 MOPS 緩沖液

三羥甲基氨基甲烷(Tris)是一種應用非常廣泛的有機試劑。它及其衍生物被廣泛應用于生物化學和分子生物學實驗中的緩沖液的制備，可用于制作藥物、有機合成、生物緩沖劑等。

用途：可以用于進行試劑的配制、蛋白質電泳、抗原和抗體稀釋等。優(yōu)點：1)溶解性：Tris能夠很好地溶解在水中，便于制備不同濃度的緩沖液;2)穩(wěn)定性：Tris-HCl緩沖液在儲存和使用過程中穩(wěn)定性較好;3)緩沖范圍：Tris-HCl緩沖液的緩沖范圍在中性偏堿，適合保護含酶的試劑組分;4)低毒性：Tris是一種低毒性的化學品，適合用于生物實驗。缺點：1)溫度效應大：溫度變化對緩沖液pH值的影響較大;2)潛在的離子干擾：Tris-HCl緩沖液中的氯離子可能會在某些實驗中引起干擾;3)成本：相比于PBS等緩沖液，Tris可能成本較高。

Tris鹽酸緩沖液中加入EDTA制成“TE緩沖液”，TE緩沖液是弱堿性，對DNA的堿基有保護性，因此，DNA在TE中的穩(wěn)定性較好，不易被破壞完整性或產生開環(huán)及斷裂，TE緩沖液被用于DNA的穩(wěn)定和儲存。

將調節(jié)pH值的酸溶液換成乙酸，則獲得“TAE緩沖液”(Tris/Acetate/EDTA)，將調節(jié)pH值的酸溶液換成硼酸，則獲得“TBE緩沖液”(Tris/Borate/EDTA)。TAE與TBE是使用最廣泛的緩沖系統。

MOPS是一種有機磺酸類化合物，由3-(N-嗎啉)丙磺酸(MOPS)配制而成, 使用濃度為0.01M-0.05M，常用的緩沖范圍在pH 6.5-7.9，最佳緩沖區(qū)間大約在pH 6.8-7.4，MOPS具有良好的水溶性和穩(wěn)定性。在RNA電泳中，MOPS緩沖劑主要通過其離子化作用來維持電泳過程中的pH穩(wěn)定，從而防止RNA的降解和變性。此外，MOPS還具有較低的離子強度，可以減少RNA分子之間的相互作用，提高分離效果。

TBE、TAE、MOPS作為實驗室儲備溶液中最常見的幾種緩沖液，其緩沖能力與應用場景卻有一些區(qū)別。TAE 的緩沖能力弱于 TBE，并且 TBE 跑膠分辨率高于 TAE。在應用時，TBE 常用于小分子 DNA 片段電泳分析，TAE 適用于大分子 DNA 片段電泳分析及后續(xù)酶促實驗，MOPS 則適用于更多RNA 電泳分析。

圖片

蛋白電泳緩沖液

蛋白電泳緩沖液種類非常之多，需要根據凝膠體系來進行選擇。凝膠系統為 Tris-甘氨酸體系時，可選擇 Tris-甘氨酸電泳緩沖液，凝膠系統為 Bis-Tris 體系時，可選擇 MES 或 MOPS 緩沖液，當凝膠系統為 Tris-tricine 體系時，則選擇 Tricine 緩沖液。

并且，蛋白電泳緩沖液分為變性與非變性緩沖液，區(qū)別在于變性緩沖液需加入 SDS 中和電荷。我們通常研究 WB、IP 時，使用變性緩沖液研究分子量大小即可，非變性緩沖液常用于研究蛋白空間結構、等電點等。

圖片

上樣緩沖液

上樣緩沖液(Loading Buffer)是各類實驗不可缺少的，可根據實驗類型選擇不同的 Buffer，以下展示

DNA 電泳 Loading Buffer、RNA 電泳 Loading Buffer 以及 SDS-PAGE Loading Buffer 的配制方法。

圖片

分子雜交常用溶液

分子雜交包含了核酸雜交和蛋白雜交，在實驗過程中，各類常用溶液也是必不可少的一環(huán)。使用膜雜交法時，可選擇 Denhardt's 溶液，核酸雜交中變性和清洗，可選擇 SSC 溶液、 DNA 變性緩沖液。

圖片

蛋白清洗、轉膜常用溶液

蛋白分析的過程，少不了轉膜液、清洗液的參與。WB 轉膜液用于將印跡從凝膠轉印至膜上，TBST 緩沖液可以用于 WB、IF、IHC 等實驗中封閉液、一抗或二抗配制以及抗體孵育后的洗滌，WB 封閉液則可用于減少非特異性抗體結合。TBST緩沖液TBST中含有Tris-HCl，NaCl，tween20這三種物質，是做Western Blotting中常用的一種洗膜緩沖液。目的是洗掉非特異性吸附的蛋白質，并且維持一個接近的天然環(huán)境。

圖片

細胞培養(yǎng)常用平衡鹽溶液

平衡鹽溶液是細胞培養(yǎng)過程中的常見溶液。在選擇平衡鹽溶液時，PBS

主要用于胚胎、組織、細胞的漂洗、凍存和培養(yǎng)，而 HBSS 除了 PBS 的用途外，還可以用于細胞培養(yǎng)試劑的配制、細胞計數的稀釋，EBSS 緩沖能力最強，是專為 CO2 環(huán)境中的細胞短期維持而設計。

磷酸鹽緩沖液(PBS)：由磷酸氫二鈉和磷酸二氫鈉按照不同比例配制而成。常用的緩沖范圍在pH5.8-8.0，使用濃度為0.1-0.2M。用途：可以用于樣本稀釋、試劑的配制、洗滌液配制等。優(yōu)點：1)生物相容性：PBS對蛋白質類生物大分子相對溫和，不會引起變性或損傷;2)穩(wěn)定性：PBS在儲存和使用過程中穩(wěn)定性好，不易受外界環(huán)境影響;3)離子強度：PBS提供了適當的離子強度，有助于維持生物分子的結構穩(wěn)定;4)無毒性：PBS成分簡單，無毒性，適合用于生物樣本和試劑的處理。缺點：1)潛在的微生物污染：PBS如果不添加防腐劑，容易受到微生物的污染;2)緩沖能力限制：在極端pH變化的情況下，PBS的緩沖能力有限，可能不足以維持穩(wěn)定的pH值;3)易與常見的鈣鎂離子及金屬離子締合成沉淀。

圖片

微生物培養(yǎng)常用溶液

在微生物培養(yǎng)中，LB 培養(yǎng)基當屬最常見的，另外還有 Ampicillin 可用于篩選抗性菌，IPTG 一般用于藍白斑篩選，而 X-Gal 作為 β-半乳糖苷酶的顯色底物，常用于 β-半乳糖苷酶原位染色檢測及藍白斑篩選。

圖片

緩沖溶液

(Buffer Solution) 通常指的是由弱酸及其鹽、弱堿及其鹽組成的混合溶液，作為分析化學當中的重要概念，緩沖液的 pH 值在一定的范圍內可以保持穩(wěn)定，不因稀釋或加入少量酸堿而發(fā)生 pH 的改變，可以廣泛應用于各類實驗中。

緩沖溶液的選擇需要根據實驗所需維持的 pH 范圍來選擇合適的緩沖液。緩沖液作為弱酸、弱堿及其鹽的混合液，要使其具備足夠的緩沖能力，最重要的是使緩沖液中弱酸的 pKa 等于或接近于實驗所要求的 pH 值，緩沖液中弱酸的 pKa 是選擇緩沖溶液的主要依據。

表 1. 常見緩沖液的緩沖范圍及 pKa。

圖片

圖片

回復此樓

» 猜你喜歡

A區(qū)一本交叉課題組，低分調劑，招收機械電子信息通信等交叉方向已經有15人回復
材料學碩318求調劑已經有18人回復
江西師范大學王昆-盧章輝課題組招化學方向碩士研究生兩名已經有3人回復
沒上岸的看過來已經有5人回復
290求調劑已經有5人回復
材料與化工，291，求調劑已經有4人回復
301求調劑已經有4人回復
一志愿東北大學080500，英一數二343分求調劑已經有5人回復
274環(huán)境工程求調劑已經有6人回復
304求調劑已經有3人回復

» 本主題相關商家推薦: (我也要在這里推廣)

1樓 2024-05-09 13:12:54

已閱回復此樓關注TA 給TA發(fā)消息送TA紅花 TA的回帖

相關版塊跳轉我要訂閱樓主科研戰(zhàn)神·王的主題更新