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DNA Marker電泳常見問(wèn)題分析
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Q：為什么marker條帶非常模糊，無(wú)法辨別具體條帶？ A：出現(xiàn)上述情況，可能有以下幾個(gè)原因： 1. marker條帶出現(xiàn)了降解。請(qǐng)確保在使用過(guò)程中避免核酸酶污染； 2.電泳緩沖液陳舊。電泳緩沖液多次使用后，離子濃度降低，pH值上升，緩沖能力減弱，從而影響電泳效果，建議經(jīng)常更換電泳緩沖液； 3.電泳條件不合適。電泳時(shí)電壓應(yīng)不超過(guò)20V/cm，溫度應(yīng)低于30℃； 4. marker上樣量過(guò)多。請(qǐng)根據(jù)說(shuō)明書選用合適上樣量； 5.凝膠質(zhì)量不好。建議使用質(zhì)量較好的瓊脂糖；此外，凝膠凝固不均勻也會(huì)導(dǎo)致條帶模糊。 Q：為什么marker條帶出現(xiàn)不規(guī)則的條帶（如啞鈴狀等）？ A：出現(xiàn)上述情況，多與以下幾個(gè)原因有關(guān)： 1.電泳緩沖液陳舊。老化的電泳緩沖液離子濃度降低，pH值上升，緩沖能力減弱，從而影響電泳效果，建議經(jīng)常更換電泳緩沖液； 2.電泳條件不合適。電泳時(shí)電壓應(yīng)不超過(guò)20V/cm，電壓太高可能也會(huì)導(dǎo)致marker條帶出現(xiàn)不規(guī)則現(xiàn)象。 此外，凝膠質(zhì)量差以及凝膠冷卻時(shí)凝固不均勻也會(huì)導(dǎo)致該現(xiàn)象出現(xiàn)。 Q：為什么marker條帶非常弱或者根本沒(méi)有條帶？ A：出現(xiàn)上述情況可能是： 1. marker上樣量較低，可適當(dāng)增加上樣量； 2. 凝膠質(zhì)量較差或凝膠凝固不均勻也會(huì)導(dǎo)致電泳條帶弱或根本沒(méi)有條帶； 3.電泳時(shí)間過(guò)長(zhǎng)導(dǎo)致marker條帶跑出凝膠，可縮短電泳時(shí)間，降低電壓，增加凝膠濃度。 Q：為什么marker缺帶？ A：對(duì)于含有較小片段的marker，如果出現(xiàn)缺帶現(xiàn)象，可能是因?yàn)椋?br /> 1.小條帶跑出凝膠或分子量大小非常相近的條帶不易辨認(rèn)所致，可適當(dāng)縮短電泳時(shí)間，降低電壓，同時(shí)增加凝膠濃度； 2.凝膠中EB含量過(guò)低，導(dǎo)致大片段結(jié)合EB量太少或沒(méi)有，在紫外光下亮度太低，可適當(dāng)增加EB用量。 畢合生物（www.bihebio.com/）提供服務(wù)內(nèi)容：分子生物學(xué)、免疫, 重組蛋白及ELISA相關(guān)、活性小分子化合物、高端化學(xué)、材料化學(xué)、細(xì)胞資源庫(kù)與培養(yǎng)相關(guān)、生命科學(xué)、天然產(chǎn)物 |
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