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DNA Marker產(chǎn)品選擇指南 已有1人參與
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1.Marker選擇標準 （1）應(yīng)選擇在目標片段大小附近ladder較密的marker，這樣對目標片段大小的估計較準確。 （2）所選marker應(yīng)能清楚反映目標片段的大小，且次要片段大小也能反映出來。如作酶切鑒定時，目的片段和切后載體片段最好能在同一個marker中反映出來，若二者不能兼顧，將前者作為主要考慮要素。 2.常見問題分析 Q：為什么marker條帶非常模糊，無法辨別具體條帶？ A：出現(xiàn)上述情況，可能有以下幾個原因：1. marker條帶出現(xiàn)了降解。請確保在使用過程中避免核酸酶污染；2. 電泳緩沖液陳舊。電泳緩沖液多次使用后，離子濃度降低，pH值上升，緩沖能力減弱，從而影響電泳效果，建議經(jīng)常更換電泳緩沖液；3. 電泳條件不合適。電泳時電壓應(yīng)不超過20V/cm，溫度應(yīng)低于30℃；4. marker上樣量過多。請根據(jù)說明書選用合適上樣量；5. 凝膠質(zhì)量不好。建議使用質(zhì)量較好的瓊脂糖；此外，凝膠凝固不均勻也會導(dǎo)致條帶模糊。 Q：為什么marker條帶出現(xiàn)不規(guī)則的條帶（如啞鈴狀等）？ A：出現(xiàn)上述情況，多與以下幾個原因有關(guān)：1. 電泳緩沖液陳舊。老化的電泳緩沖液離子濃度降低，pH值上升，緩沖能力減弱，從而影響電泳效果，建議經(jīng)常更換電泳緩沖液；2. 電泳條件不合適。電泳時電壓應(yīng)不超過20V/cm，電壓太高可能也會導(dǎo)致marker條帶出現(xiàn)不規(guī)則現(xiàn)象。此外，凝膠質(zhì)量差以及凝膠冷卻時凝固不均勻也會導(dǎo)致該現(xiàn)象出現(xiàn)。 Q：為什么marker條帶非常弱或者根本沒有條帶？ A：出現(xiàn)上述情況可能是：1. marker上樣量較低，可適當增加上樣量；2. 凝膠質(zhì)量較差或凝膠凝固不均勻也會導(dǎo)致電泳條帶弱或根本沒有條帶；3. 電泳時間過長導(dǎo)致marker條帶跑出凝膠，可縮短電泳時間，降低電壓，增加凝膠濃度。 Q：為什么marker缺帶？ A：對于含有較小片段的marker，如果出現(xiàn)缺帶現(xiàn)象，可能是因為：1. 小條帶跑出凝膠或分子量大小非常相近的條帶不易辨認所致，可適當縮短電泳時間，降低電壓，同時增加凝膠濃度；2. 凝膠中EB含量過低，導(dǎo)致大片段結(jié)合EB量太少或沒有，在紫外光下亮度太低，可適當增加EB用量。 畢合生物提供服務(wù)內(nèi)容：分子生物學(xué)、免疫, 重組蛋白及ELISA相關(guān)、活性小分子化合物、高端化學(xué)、材料化學(xué)、細胞資源庫與培養(yǎng)相關(guān)、生命科學(xué)、天然產(chǎn)物 |
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2樓2024-04-28 17:47:23
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