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生物化學實驗的基本操作-1
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一、玻璃儀器的使用及清潔 （一）玻璃儀器的洗滌及干燥1、一般儀器：燒杯、試管、離心管等普通玻璃儀器，可直接用毛刷蘸餐洗凈刷洗，然后用自來水沖洗，直至容器內(nèi)不掛水珠即可。最后用少量蒸餾水沖洗內(nèi)壁2－3次，倒置晾干即可。2、容量分析儀器：容量瓶、滴定管及吸管等容量儀器，用后用自來水多次沖洗，如能清潔（壁不掛水珠），再用蒸餾水少量沖洗2~3次晾干即可備用。若仍不干凈附有油污等，則須于干后放入鉻酸洗液內(nèi)浸泡數(shù)小時，然后倒凈（或撈出）洗液，用自來水充分沖洗至水不顯黃色后再沖幾次，最后用少量蒸餾水沖洗2~3次晾干備用。在做酶學實驗時，對儀器的清潔要求更高，因如有極微量的污物（如重金屬離子）即可導致整個實驗失敗。因此，必要時儀器經(jīng)上述方法洗滌后，還需用稀鹽酸或稀硝酸洗滌，以除去鉻及其它金屬離子，然后再用自來水、蒸餾水沖洗。生化實驗室常用的洗液有以下幾種： （1）鉻酸洗液：為最常用的洗液，由重鉻酸鉀、粗硫酸及水配制而成，去污力強，清洗效果好。其配制方法有多種，可根據(jù)需要進行選擇，常用的配方如下表。 重鉻酸鉀（ｇ）10060100 水（ml）750300200 粗硫酸（ml）250460800 清潔性能較弱較強（常用）最強 配制方法為：先將重鉻酸鉀溶于水，再慢慢加入濃硫酸。因配制過程產(chǎn)生大量熱，容器需放入冷水中，邊加硫酸邊攪動混合。由于產(chǎn)熱量很大，使用玻璃容器有破裂的危險，所以最好用耐高溫的陶瓷或耐酸的搪瓷容器。洗液可多次反復(fù)使用，如效力變?nèi)酰杉尤肷倭恐劂t酸鉀及濃硫酸繼續(xù)使用，但如果變?yōu)榫G色，則不宜再用。（2）10%尿素液：為蛋白質(zhì)良好溶劑，幫適用于洗滌盛血的容器。（3）草酸鹽液：用于清洗過錳酸鉀的痕跡。（4）硝酸液：用1：1的硝酸水溶液，用于清洗CO2測定器及微量滴定管。（5）乙二胺四乙酸二鈉（EDTA－Na2）液：5~10%的EDTA－Na2液可用于洗滌器皿內(nèi)無機鹽類。玻璃儀器的干燥方法可根據(jù)不同儀器的種類而定。一般地說洗凈后的玻璃儀器，如不急用應(yīng)倒放在晾架上令其自然干燥。若有急用可放在烘烤箱中烤干，但容量玻璃儀器，如容量瓶、吸量管、滴定管以及燒結(jié)、結(jié)構(gòu)復(fù)雜的玻璃儀器等，嚴禁烘烤。此類儀器，如急用可采用水泵抽氣法干燥。 （二）常用玻璃儀器的使用1、吸量管：吸量管是用來測量一定容積的液體，并把它從一個器皿轉(zhuǎn)移至另一個器皿中的量器。常用的吸量管有以下幾種：（1）刻度吸量管：刻度吸量管是多刻度吸量管，有0.1、0.2、 0.5、1.0、2.0、5.0、10.0毫升等規(guī)格。吸量管刻度所標的數(shù)字有自上而下和自下而上兩種，使用之前應(yīng)仔細分辨。實驗室所用之刻度吸管多屬于刻度到尖端的吸管，所以要吹出尖端留存的液體。（2）奧氏吸管：在量取粘度較大的液體如血液、血清等時，應(yīng)當使用奧氏吸管。這種吸管也是單標的，并且在其下端有一個膨大部分。所以液體與吸管表面接觸面積較小，當量取血液時，較他種吸管準確。奧氏吸管的容量包括遺留在尖端的液體，故在緩緩使液體流出后，再停留數(shù)秒鐘，吹出最后一滴。在學生實驗中常用的有1、2、5毫升等規(guī)格。吸量管使用法：使用吸量管時，用拇指和中指靠近頂端部分。將管的下端插入液體里，用吸球吸入液體至需要刻度的標線上1~2厘米處（插入液面下的部分不可太深，以免管的外壁沾附的溶液太多；也不可太淺，防止空氣突然進入管內(nèi)，將溶液吸入吸球內(nèi)），將已充滿液體的吸量管提出液面，用小片濾紙揩去管外沾附的溶液，把吸管提到與眼睛在同一水平線上。然后小心松開上口，按所需要液體容積緩緩自由流出。最后再根據(jù)規(guī)定吹出或者不吹出尖端的一滴。 （3）微量加樣器2、容量瓶及量筒：容量瓶是一個細長頸梨形的平底瓶，具有磨口塞，頸上有標線，表示在所示溫度下（一般為20℃）當液體充滿到標線時，液體體積恰好與瓶下所注明的體積相等。容量瓶有10、25、 50、100、200、250、500、1000、2000毫升等規(guī)格。容量瓶是裝量型的定量容器，多用作稀釋溶液或配制精確試劑。當將液體加至刻度后須用瓶塞塞好，顛倒混勻數(shù)次方可使用。容量瓶是較精確的定量容器，不得直接加熱或烘烤，也不應(yīng)將盛有溶液的容量瓶放入冰箱內(nèi)。當配制溶液需要加熱促其溶解時，必須在燒杯中加熱溶解，并待溶液達到室溫后，再定量地轉(zhuǎn)入容量瓶內(nèi)，然后稀釋到刻度，并要注意搖勻。當所量取的液體量要求不十分準確時，可使用量筒，因其較使用吸管或量瓶更為簡便，量筒之底座及筒身是焊接一起的，因而不能 量取過熱液體，更不能直接加熱，以防炸裂。 3、滴定管：滴定管是供容量分析滴定之用，有帶玻塞及橡皮管的兩種類型。前者用以量酸，后者用以量堿。滴定管有刻度較精細的微量滴定管，有1.0、 2.0、5.0、10毫升等規(guī)格。還有25、50、100毫升等規(guī)格的常量滴定管。使用滴定管應(yīng)該注意以下事項：（1）檢查是否清潔干燥，是否漏水，玻塞是否滑潤，如有漏水或轉(zhuǎn)動不靈，應(yīng)拆下活塞重新涂抹凡士林。涂抹前要將玻塞擦干，用手指沾少量凡士林在活塞兩頭各擦一薄層，將活塞插入槽內(nèi)，然后向同一方向轉(zhuǎn)動活塞，直到從外面看時，全部透明為止。油涂好后，在活塞的小頭的槽上套一橡皮圈，以防活塞滑脫。（2）使用前必須認出每一格表示多少毫升。先用少量滴定液清洗滴定管2~3次，然后方可裝液。裝液體后，管內(nèi)如有氣泡必須排出。（3）滴定前先應(yīng)讀取起始點。滴定時，左手控制玻塞，右手持瓶，邊滴邊搖，密切注意被滴定溶液的顏色變化。（4）裝置滴定管時，管身必須與地面垂直。讀數(shù)時眼睛與溶液月形面下緣在同一水平線上，不要仰頭或低頭讀數(shù)。（5）如用酸式滴定管裝堿性溶液，滴定后應(yīng)立即洗凈，以免活塞粘連。 畢合生物（www.bihebio.com)提供服務(wù)內(nèi)容：分子生物學、免疫, 重組蛋白及ELISA相關(guān)、活性小分子化合物、高端化學、材料化學、細胞資源庫與培養(yǎng)相關(guān)、生命科學、天然產(chǎn)物 |
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