 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 1 | 1/1 | 返回列表 |
| 查看: 504 | 回復(fù): 0 | |||
基礎(chǔ)生物實(shí)驗(yàn)外?/a>新蟲 (初入文壇)
|
[交流]
Q-PCR干粉引物，如何溶解？保存溫度和時(shí)間是多少？
|
|
現(xiàn)代科研基本離不開分子實(shí)驗(yàn)，分子實(shí)驗(yàn)又基本離不開PCR，PCR肯定離不開引物了，今天給小伙伴們討論收到引物的處理問題。 QPCR 干粉引物溶解稀釋的一般方法如下： 收到引物后，在開啟離心管蓋前，在3000-4000轉(zhuǎn)/分鐘的轉(zhuǎn)速下離心1分鐘，以防開蓋時(shí)引物干粉散失。因?yàn)橐镌诟稍镞^程中，寡核苷酸在EP管底部形成白色片狀沉淀。鑒于運(yùn)輸過程中沉淀會(huì)飄起，在打開管蓋之前進(jìn)行簡短離心這一步驟至關(guān)重要。 引物保存在高濃度的狀況下比較穩(wěn)定。如果對實(shí)驗(yàn)的重復(fù)性要求較高，合成的 OD 數(shù)較大，建議分裝，避免反復(fù)凍融。 引物一般配制成10-100umol/l。 引物的濃度可以通過以下公式計(jì)算：引物終濃度（μM）=所需引物量（μg）/引物分子量（g/mol）/反應(yīng)體積（L）�？梢愿鶕�(jù)引物的OD值和分子量來計(jì)算需要加入多少液體才達(dá)到100μM的濃度，但沒必要學(xué)這個(gè)，一般公司都會(huì)直接給算好，在標(biāo)簽處標(biāo)明需要加入多少液體溶解以達(dá)到100μM的濃度。 用哪種溶劑溶解引物？ 如果需要稀釋引物，可以使用滅菌的去離子水或TE緩沖液（pH7.4-8.0）作為溶劑。其中，TE緩沖液比較穩(wěn)定，能提供穩(wěn)定的pH環(huán)境，適合于保存引物（以及質(zhì)�；蚧蚪MDNA），但也有人認(rèn)為，TE中的EDTA分子會(huì)影響后續(xù)PCR的效率。 引物的保存溫度和時(shí)間有什么限制？ 未溶解的引物在-20℃下可保存至少1年，溶解后的引物在-20℃下避免反復(fù)凍融，可以保存至少半年以上。如果對實(shí)驗(yàn)的重復(fù)性要求較高，合成的OD值較大，建議將溶解好的引物事先稀釋為100μmol/L的儲(chǔ)存液，分裝數(shù)份保存于-20℃冰箱。使用前，將濃溶液稀釋成工作液（10pmol/μl或20pmol/μl）后進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。 |
回復(fù)此樓» 猜你喜歡
環(huán)境工程專碩307 一志愿211 四六級已過 求調(diào)劑
已經(jīng)有5人回復(fù)
-
282求調(diào)劑
已經(jīng)有8人回復(fù)
-
0855機(jī)械工程324求調(diào)劑
已經(jīng)有7人回復(fù)
-
求調(diào)劑
已經(jīng)有4人回復(fù)
-
材料復(fù)試調(diào)劑
已經(jīng)有7人回復(fù)
-
080500材料科學(xué)與工程
已經(jīng)有7人回復(fù)
-
學(xué)碩材料275調(diào)劑
已經(jīng)有9人回復(fù)
-
274求調(diào)劑
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
307求調(diào)劑
已經(jīng)有4人回復(fù)
-
085600材料調(diào)劑 總分330
已經(jīng)有3人回復(fù)
» 本主題相關(guān)商家推薦: (我也要在這里推廣)
相關(guān)版塊跳轉(zhuǎn)
我要訂閱樓主 基礎(chǔ)生物實(shí)驗(yàn)外?/a> 的主題更新
| 1 | 1/1 | 返回列表 |
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 材料專碩346求調(diào)劑 +3 | 旺一下 2026-03-04 | 3/150 |
|
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 一志愿中科大080500總分324求調(diào)劑 +3 | jorna 2026-03-03 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 求調(diào)劑 +6 | 博斯特525 2026-03-04 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 化學(xué)工程求調(diào)劑 +5 | 化工人999 2026-03-04 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 環(huán)境調(diào)劑 +6 | 柒槿levana 2026-03-01 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 歡迎采礦、地質(zhì)、巖土、計(jì)算機(jī)、人工智能等專業(yè)的同學(xué)報(bào)考 +9 | pin8023 2026-02-28 | 12/600 |
|
|
|
[考研] 347求調(diào)劑 +5 | 啊歐歐歐 2026-03-03 | 5/250 |
|
|
|
[碩博家園] 2025屆雙非化工碩士畢業(yè)，申博 +4 | 更多的是 2026-02-27 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 267求調(diào)劑 +6 | 釣魚佬as 2026-03-02 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 291求調(diào)劑 +3 | MuoLuo1312 2026-03-02 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 0857調(diào)劑 +6 | 一ll半 2026-02-28 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 課題組接收材料類調(diào)劑研究生 +6 | gaoxiaoniuma 2026-02-28 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 298求調(diào)劑 +10 | 人間唯你是清歡 2026-02-28 | 14/700 |
|
|
|
[考研] 290分材料工程085601求調(diào)劑 數(shù)二英一 +8 | llx0610 2026-03-02 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 085600材料工程一志愿中科大總分312求調(diào)劑 +9 | 吃宵夜1 2026-02-28 | 11/550 |
|
|
|
[基金申請] 此成果不能導(dǎo)入原因：元數(shù)據(jù)必填信息不完整，可 進(jìn)行補(bǔ)充。 +4 | Kittylucky 2026-03-02 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 284求調(diào)劑 +10 | 天下熯 2026-02-28 | 11/550 |
|
|
|
[考研] 化工專碩342，一志愿大連理工大學(xué)，求調(diào)劑 +6 | kyf化工 2026-02-28 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 328求調(diào)劑 +3 | aaadim 2026-03-01 | 5/250 |
|
|
|
[論文投稿]
求助coordination chemistry reviews 的寫作模板
 10+3
|
ljplijiapeng 2026-02-27 | 4/200 |
|