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YX科研小助理新蟲 (小有名氣)
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ELISA成功與否在此一舉
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ELISA（酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)）是一種常用的生物化學(xué)分析技術(shù)，可用于判斷受檢標(biāo)本中是否含有待檢測(cè)抗原或抗體，是免疫反應(yīng)的定性和定量檢測(cè)方法，也是許多科研人員的日常實(shí)驗(yàn)之一。這么重要的實(shí)驗(yàn)，每個(gè)步驟可都不能疏忽，其中最最最關(guān)鍵的一步，也是整個(gè)實(shí)驗(yàn)的最后一步，便是我們今天要介紹的——酶標(biāo)儀的分析。 酶標(biāo)儀 酶標(biāo)儀是酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)的專用儀器，它又稱微孔板檢測(cè)器�？珊�(jiǎn)單地分為半自動(dòng)和全自動(dòng)兩大類，但其工作原理基本上都是一致的,即用比色法來進(jìn)行分析。測(cè)定一般要求測(cè)試液的最終體積在250 μL以下。 原理 酶標(biāo)儀的主要操作是使用光電比色計(jì)或分光光度計(jì)，測(cè)量光通過測(cè)試樣品前后的能量差。測(cè)試物質(zhì)吸收引起的光能差通常與測(cè)試物質(zhì)的濃度線性相關(guān)。 酶標(biāo)儀的波長(zhǎng)范圍通常為400 nm至750 nm，并受濾光片或衍射光柵（納米）限制。光學(xué)系統(tǒng)中通過光纖為含有樣品的微孔板孔提供光。穿過樣品的光束直徑范圍為1至3毫米，樣品發(fā)出的光由檢測(cè)裝置檢測(cè)，檢測(cè)裝置放大信號(hào)并計(jì)算樣品的吸光度。 分類 根據(jù)酶標(biāo)儀的工作原理，我們可以將其進(jìn)行分類。 顏色反應(yīng)型酶標(biāo)儀 通過酶催化底物的顏色反應(yīng)來測(cè)量樣品中的酶活性或待測(cè)物的濃度。 熒光反應(yīng)型酶標(biāo)儀 通過酶催化底物的熒光反應(yīng)來測(cè)量樣品中的酶活性或待測(cè)物的濃度。 ELISA酶標(biāo)儀 專門用于執(zhí)行ELISA，用于檢測(cè)抗體或抗原的存在和濃度。 發(fā)光反應(yīng)型酶標(biāo)儀 通過酶催化底物的發(fā)光反應(yīng)來測(cè)量樣品中的酶活性或待測(cè)物的濃度。 使用方法 0 1 準(zhǔn)備工作 a.確保酶標(biāo)儀和所需的微孔板、試劑等干凈，并進(jìn)行校準(zhǔn)和預(yù)熱。 b.準(zhǔn)備好所需的樣品和試劑，并對(duì)其進(jìn)行適當(dāng)?shù)南♂尰蝾A(yù)處理。 0 2 設(shè)置酶標(biāo)儀 a.打開酶標(biāo)儀，進(jìn)行初始化設(shè)置。 b.設(shè)置所需的波長(zhǎng)或?yàn)V光片，選擇適當(dāng)?shù)臋z測(cè)光源和檢測(cè)范圍。 0 3 準(zhǔn)備樣品和試劑 a.準(zhǔn)備樣品和控制組，并將其分配到微孔板中的相應(yīng)孔位。 b.添加適當(dāng)?shù)脑噭绲孜�、底物溶劑、酶�?biāo)記試劑等。 0 4 測(cè)量 a.將裝有樣品和試劑的微孔板放入酶標(biāo)儀的樣品架中，并確保對(duì)齊。 b.選擇所需的測(cè)量時(shí)間和測(cè)量模式（吸光度、熒光或發(fā)光）。 c.啟動(dòng)測(cè)量程序，等待測(cè)量完成。 0 5 數(shù)據(jù)分析 a.使用酶標(biāo)儀提供的軟件或其他數(shù)據(jù)處理工具進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。 b.對(duì)于吸光度測(cè)量，選擇適當(dāng)?shù)臉?biāo)準(zhǔn)曲線，將吸光度值轉(zhuǎn)換為待測(cè)物的濃度。 c.對(duì)于熒光或發(fā)光測(cè)量，選擇適當(dāng)?shù)臉?biāo)準(zhǔn)曲線，將測(cè)量值與標(biāo)準(zhǔn)曲線進(jìn)行比較或計(jì)算。 注意事項(xiàng) 酶標(biāo)儀的功能是用來讀取ELISA試劑盒的反應(yīng)結(jié)果，因此要得到準(zhǔn)確結(jié)果，試劑盒的使用必須規(guī)范。許多醫(yī)院在使用酶標(biāo)儀之前是通過目測(cè)判斷結(jié)果，操作過程隨意性較大，在使用酶標(biāo)儀后如果不能及時(shí)糾正操作習(xí)慣，會(huì)造成較大誤差。下面是一些使用酶標(biāo)儀時(shí)需要注意的地方： 使用加液器加液，加液頭不能混用。 洗板要洗干凈。如果條件允許，使用洗板機(jī)洗板，避免交叉污染。 在測(cè)量過程中，請(qǐng)勿碰酶標(biāo)板，以防酶標(biāo)板傳送時(shí)擠傷操作人員的手。 請(qǐng)勿將樣品或試劑灑到儀器表面或內(nèi)部，操作完成后請(qǐng)洗手。 如果使用的樣品或試劑具有污染性、毒性和生物學(xué)危害，請(qǐng)嚴(yán)格按照試劑盒的操作說明，以防對(duì)操作人員造成損害。 如果儀器接觸過污染性或傳染性物品，請(qǐng)進(jìn)行清洗和消毒。 不要在測(cè)量過程中關(guān)閉電源。 對(duì)于因試劑盒問題造成的測(cè)量結(jié)果的偏差，應(yīng)根據(jù)實(shí)際情況及時(shí)修改參數(shù)，以達(dá)到最佳效果。 使用后蓋好防塵罩。 出現(xiàn)技術(shù)故障時(shí)應(yīng)及時(shí)與廠家聯(lián)系，切勿擅自拆卸酶標(biāo)儀。 |
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